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nthy-ori-3-1人甲状腺正常细胞(通过str)

简要描述:

nthy-ori-3-1人甲状腺正常细胞(通过str)
1)来源:详细资料请咨询上海文韧生物
2)含量:1x106 个/mL
3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
气相:空气,95%;CO2,5%

产品时间:2020-03-21

访问量:165

厂商性质:经销商

nthy-ori-3-1人甲状腺正常细胞(通过str)

细胞名称

nthy-ori-3-1人甲状腺正常细胞(通过str)

种属

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养ye去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换ye以及传代,一般2天换一次ye;

2.待细胞长满瓶底面积80%,需要对其进行传代,传代比例为1:2到1:3;

3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化ye置于室温预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于室温孵育消化(首次次消化需置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移ye枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬ye,1000rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。(具体根据随货说明书进行操作)

保存

冻存条件:完全培养基+FBS+DMSO

(备注:建议使用本公司的培养条件,用4度保存的冷冻ye直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:yedan存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂,培养ye有漏ye:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)

3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养ye培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养ye继续培养,中间注意观察,

细胞培养技术是离体方法中主要的一种,是从动物体内取出细胞,模拟体内的生理环境,在无菌、适温、丰富的营养条件下,使离体细胞生存、生长并维持结构和功能的一门技术。细胞实验是科学探究的基础,细胞实验服务可以提供包括细胞侵袭检测、细胞划痕检测以及细胞增殖实验等的研究。细胞体外培养实验对于科学研究至关重要,然而在细胞培养中,常会因为不适宜的环境条件以及不得当的操作导致细胞被污染。在细胞培养实验中如何避免污染是一项很重要的工作,现在我们来看一下细胞体外培养中常见的污染种类,以及避免方法。
1、外源性污染
外源性污染中应注意实验室内空气保持洁净,定期清扫、紫外消毒,操作者严格按照无菌操作进行。由于离体细胞对各种毒物都很敏感,所以细胞培养所用器材的清洗、消毒处理非常关键。
培养所用的物品器具要彻底清洗消毒,超净台的物品摆放要井然有序,避免反复烧烤已经高温灭菌的物品以及避免因细胞株种类过多而引起的细胞间交叉污染。细胞实验室的构建也是各个细胞实验服务公司必备的实验室,实验室需要配备CO2培养箱、超净工作台/生物安全柜、纯水系统以及液氮罐等设备,同时需要保证细胞实验室的干净与整洁。
2、支原体污染
  支原体是一种没有细胞壁的原核生物,大多呈不规则球状或丝状,由于它的直径小(约为0.15-2 µm),而且形状灵活,所以能逃过实验室常用的滤膜。在光学显微镜下支原体不可见,对培养基的需求有限,一般不会引起培养物混浊,因此支原体慢慢的杀细胞于无形之中。细胞被支原体污染后,其生长繁殖和形态、代谢及功能、染色体及免疫细胞产量均会受到影响,支原体污染能够消耗营养物,促进代谢积累,导致PH改变,诱导或抑制细胞因子表达,并改变培养细胞的代谢、增殖特征以及形态。
据一些资料报道,支原体污染在细胞体外培养过程中发生率高达15%~80%。为了避免支原体污染的发生,对培养物进行常规的支原体检测非常重要,应严格按照细胞培养操作程序进行操作、确保适宜的环境条件、严格的无菌观念操作、定期清洁消毒、任何培养用液使用前均进行无菌检查、只引进来源可靠的细胞,同时一旦发现污染的细胞应灭活弃之避免进一步污染扩散。美迪西提供细胞实验服务,其生物部在分子生物学、细胞生物学、体外生物学和结构生物学领域有丰富广泛的经验。从最初的cDNA文库构建到药物设计,通过蛋白质纯化,结构测定和分析测定,提供一套完整的生物学服务。
3、霉菌污染
  霉菌污染也是细胞培养过程中常见的一个问题,如果细胞被霉菌污染后,在低倍镜下可见乳白色的团状漂浮物,培养液无变化。高倍镜下可见明显的菌丝,细胞活力变差,生长速度明显变慢,甚至死亡。细胞被霉菌污染时,若非价值很高的珍贵细胞一般选择扔掉,且相关的容器也要做严格处理。有文献报道,低速离心法可去除细胞培养中的霉菌污染,不仅实验条件简单,能完全去除霉菌,且所用时间短.并能将不良反应降至最低程度。
 细胞体外培养中常见的污染种类除了上述之外,还有真菌、病毒原虫等污染,不管是何种类型的污染,总之在细胞体外培养实验中,预防污染的方法是良好的细胞培养技巧和正确的态度。同时在体外细胞培养时,还需要主动避免细胞实验对人的影响。实验人员需要注意一些操作细节.如避免由于眼睛及皮肤长时间暴露在紫外线下造成的损伤,同时避免由于误照引起的电光性眼炎。紫外线灯在消毒时可产生刺激人体呼吸道黏膜的臭氧,臭氧过多时也会引起中毒反应,所以为避免损伤出现应使用无臭氧紫外线灯或在消毒完30分钟后再进入超净工作室操作。

选对培养基很重要
细胞都没有绝对固定的培养条件,只是更加适合。比如在MEM中培养的细胞,很可能在DMEM或M199中也很容易生长。总之,MEM是贴壁细胞的选择,而 RPMI-1640是悬浮细胞培养一个好的开始,当然,这是在对细胞培养条件不明确的时候的明智之举,当培养条件有标注的时候,需要按照标注的来进行,因为好的细胞会给实验带来意想不到的效果.
L-谷氨酰胺和GlutaMAX-I的选择
 L-谷氨酰胺在脱掉氨基后可作为培养细胞的能量来源、多参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解,而 L-谷氨酰胺的降解会导致氨的形成,氨对细胞有毒性,故敏感细胞不建议使用。 一般培养细胞建议使用GlutaMAX-I,因为GlutaMAX-I 二肽溶液有最小的降解,如果在相同条件下,L-谷氨酰胺几乎完全降解。
酚红在细胞培养时的参考
酚红在培养基中被用来作为PH值的指示剂:中性时为红色,酸性时为黄色,碱性时为紫色。研究表明,酚红可以模拟固醇类激素的作用,(特别是雌激素)。为避免固醇类反应,培养细胞,尤其是哺乳类细胞时,用不加酚红的培养基。由于酚红干扰检测,一些研究人员在做流式细胞检测时,不使用加有酚红的培养基。
如何用台盼兰计数活细胞? 
用无血清培养基把细胞悬液稀释到200~2000个/毫升,在0.1毫升的细胞悬液中加入0.1毫升的0.4%的台盼兰溶液。轻轻混匀,数分钟后,用血球计数板计数细胞。活细胞排斥台盼兰,不会有任何变化,而染成蓝色的细胞就是死细胞。

上海文韧生物科技有限公司

 

 

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