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细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

  • 发布日期:2020-03-08      浏览次数:2240
    • 细胞培养的具体步骤和要求以及注意事项

       

      ---文韧细胞库相关产品

       

      一、 复苏

      1. 把冻存管从液氮中取出来,立即投入37℃水浴锅中,轻微摇动。液体都融化后(大概1-1.5分钟),拿出来喷点酒精放到超净工作台里。

      2. 把上述细胞悬液吸到装10ml培养基的15ml的离心管中(用培养基把冻存管洗一遍,把粘在壁上的细胞都洗下来),1000转离心5分钟。

      3. 把上清液倒掉,加1ml培养基把细胞悬浮起来。吸到装有10ml培养基的10cm培养皿中前后左右轻轻摇动,使培养皿中的细胞均匀分布。

      4. 标好细胞种类和日期、培养人名字等,放到CO2培养箱中培养,细胞贴壁后换培养基。

      5. 3天换一次培养基。

      二、 传代

      1. 培养皿中的细胞覆盖率达到80%-90%时要传代。

      2. 把原有培养基吸掉。

      3. 加适当的胰蛋白酶(能覆盖细胞就行),消化1-2分钟。

      4. 细胞都变圆后加如入等体积的含血清的培养基终止消化。

      5. 用移液枪吹打细胞,把细胞都悬浮起来。

      6. 把细胞吸到15ml的离心管中,1000转离心5分钟。

      7. 倒掉上清液,加1-2ml培养基,把细胞都吹起来。

      8. 根据细胞种类把细胞传到几个培养皿中。一般,癌细胞分5个,正常细胞传3个。继续培养。

      三、 冻存

      把细胞消化下来并离心(同上)。用配好的冻存液把细胞悬浮起来,分装到灭菌的冻存管中,静止几分钟,写明细胞种类,冻存日期。4℃ 30min,-20℃ 30min,-80℃过夜,然后放到液氮灌中保存。

      冻存液的配制: 70%的完全培养基+20%FBS+10%DMSO. DMSO要慢慢滴加,边滴边摇。

      要注意的就是无菌操作!

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