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细胞的复苏与冻存

  • 发布日期:2020-03-13      浏览次数:488
    • 细胞的复苏与冻存


      细胞复苏:指将冻存的细胞解冻之后重新培养,细胞恢复生长的过程。
      复苏过程如下图所示:


      常见问题解答:
      为什么细胞复苏后,很多难以贴壁?

      D:忽略培养基的问题,主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记重要的融化速度要快,可不时摇动冷冻管,使之尽快通过易受损的温度段(-5~0℃)。

      为什么细胞贴壁了,却长不起来?

      D:此时需要考虑的是细胞密度问题,一些细胞倾向于维持一定的密度,若复苏的细胞生长缓慢,可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养。


      细胞冻存:将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃),细胞内的代谢降低,可大限度的保存细胞活力,以便长期储存。



      常见问题解答:
      目前细胞冻存液多采用的什么配方?


      D:目前细胞冻存液的配方有很多种,如培养基:血清:DMSO=7:2:1或8:1:1或5:4:1,或直接用血清:DMSO=9:1。 这里推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液,无需程序降温,细胞存活率和活力高达90%-98%,适用于干细胞冻存及无血清培养细胞。

      若没有细胞冻存盒,我们该怎么办?

      D:可先将冻存管放入4℃冰箱中10min,再移至-20℃冰箱30min,-80℃冰箱2h或过夜,后放入液氮罐内。为了节约时间,还可直接在冻存盒外包裹一团棉花,用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点,将细胞转移至-80℃冰箱过夜,再转移至液氮保存。

      细胞冻存时对细胞量有要求吗?

      D:细胞复苏时会有一定的细胞死亡,因此细胞的浓度应足够高,起始浓度106—107个/ml/管;

       

      上海文韧生物科技有限公司

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