细胞的复苏与冻存

发布日期：2020-03-13      浏览次数：1435

细胞的复苏与冻存


细胞复苏：指将冻存的细胞解冻之后重新培养，细胞恢复生长的过程。
复苏过程如下图所示：


常见问题解答：
为什么细胞复苏后，很多难以贴壁?

D：忽略培养基的问题，主要考虑细胞冻存时状态差或者复苏时动作太慢导致细胞死亡。切记重要的融化速度要快，可不时摇动冷冻管，使之尽快通过易受损的温度段(-5～0℃)。

为什么细胞贴壁了，却长不起来?

D：此时需要考虑的是细胞密度问题，一些细胞倾向于维持一定的密度，若复苏的细胞生长缓慢，可将细胞转移到较小的培养瓶/皿中培养。


细胞冻存：将细胞放在低温环境(-70℃~-196℃)，细胞内的代谢降低，可大限度的保存细胞活力，以便长期储存。



常见问题解答：
目前细胞冻存液多采用的什么配方?

D：目前细胞冻存液的配方有很多种，如培养基：血清：DMSO=7:2:1或8：1：1或5：4：1，或直接用血清：DMSO=9:1。 这里推荐使用HAKATA无血清细胞冻存液，无需程序降温，细胞存活率和活力高达90%-98%，适用于干细胞冻存及无血清培养细胞。

若没有细胞冻存盒，我们该怎么办?

D：可先将冻存管放入4℃冰箱中10min，再移至-20℃冰箱30min，-80℃冰箱2h或过夜，后放入液氮罐内。为了节约时间，还可直接在冻存盒外包裹一团棉花，用棉花代替冻存盒缓慢降温的特点，将细胞转移至-80℃冰箱过夜，再转移至液氮保存。

细胞冻存时对细胞量有要求吗?

D：细胞复苏时会有一定的细胞死亡，因此细胞的浓度应足够高，起始浓度106—107个/ml/管;

 

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