使用动物血清常常会遇到很多问题,例如:病毒感染、其他动物源的污染。使用无血清制品培养与冻存细胞,可以消除这方面的隐患。此外,无血清冻存液可以确保细胞在化学成分固定的条件下生长,更进一步确保细胞冻存时的条件稳定。
慢慢做冷冻:
若您养的是贴壁细胞,请先将细胞消化下来;若是悬浮细胞,请直接按以下步骤进行:
1. 以200-300g离心3分钟,弃去上清,收集细胞。
2. 用BI无血清冻存液将细胞重悬(不需回温),将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml,添加到冻存管中(一般每管1ml)。
3. 建议将含有细胞悬液的冻存管放进渐进降温盒或是保温杯中,置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜(或不需要程序降温)。
4. 将冻存管迅速移到液态氮中保存。
5. 冻存24小时后,建议检测细胞存活率。