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文韧教您做好悬浮细胞的冻存和复苏

  • 发布日期:2020-07-16      浏览次数:420
    • 教您做好悬浮细胞的冻存和复苏


      悬浮细胞的冻存和复苏与贴壁细胞基本一致:

      1. 冻存
      无血清冻存液,直接按以下步骤进行,

      • 以200×g-300×g离心3分钟,弃去上清,收集细胞。

      • 用无血清冻存液将细胞重悬(不需回温),将细胞密度调整为3~5x106 cells/ml,添加到冻存管中(一般每管1ml)。

      • 建议将含有细胞悬液的冻存管放入程序降温盒或是保温杯中,置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜(或不需要程序降温)。

      • 将冻存管迅速移到液态氮气相中保存。

      • 冻存24小时后,建议检测细胞存活率。


      2. 细胞的复苏,建议按以下方法操作:

      • 将细胞冻存管由液态氮气相中取出,置于室温回温,不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。

      • 在生物安全柜内,直接以少量培养基反复冲融,使细胞团块化冻。

      • 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基,再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200×g~300×g,3分钟离心收集细胞。

      • 倒去上清液,重悬细胞,移到培养瓶中培养。

      • 建议使用20%FBS复苏细胞,等细胞长满后,再降回原来血清比例。

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