文韧教您做好悬浮细胞的冻存和复苏

发布日期：2020-07-16      浏览次数：3014

教您做好悬浮细胞的冻存和复苏


悬浮细胞的冻存和复苏与贴壁细胞基本一致：

1. 冻存
无血清冻存液，直接按以下步骤进行，

• 以200×g-300×g离心3分钟，弃去上清，收集细胞。

• 用无血清冻存液将细胞重悬（不需回温），将细胞密度调整为3~5x10⁶ cells/ml，添加到冻存管中（一般每管1ml）。

• 建议将含有细胞悬液的冻存管放入程序降温盒或是保温杯中，置于-80°C冰箱6小时以上或是过夜（或不需要程序降温)。

• 将冻存管迅速移到液态氮气相中保存。

• 冻存24小时后，建议检测细胞存活率。


2. 细胞的复苏，建议按以下方法操作：

• 将细胞冻存管由液态氮气相中取出，置于室温回温，不用水浴溶解。此时可准备新鲜培养基、无菌15ml离心管、培养瓶。

• 在生物安全柜内，直接以少量培养基反复冲融，使细胞团块化冻。

• 先在无菌15ml离心管中加入5ml培养基，再将化冻的细胞悬液加入离心管中。以200×g~300×g，3分钟离心收集细胞。

• 倒去上清液，重悬细胞，移到培养瓶中培养。

• 建议使用20%FBS复苏细胞，等细胞长满后，再降回原来血清比例。