BV173人外周血B细胞系

　　选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。

　　瓶装血清一定要逐步解冻:4℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

　　热灭活是指56℃，30分钟加热已*解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，待温度升高到56℃后计时，BV173人外周血B细胞系一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。细胞缩写："BV173细胞

　　细胞名称：BV173人外周血B细胞系

　　背景资料：见细胞说明书

　　细胞来源：细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外较有名大学建系

　　规格：复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）

　　细胞冻存及复苏基本知识普及：

　　细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。

　　除此之外，还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜DMSO，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。

　　采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1到-2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内-196℃。细胞数："1*10（6）

　　生物安全级别：1

　　生物体：人

　　组织来源：肝

　　细胞形态：B细胞前体白血病

　　细胞特性：悬浮

　　细胞活力：95％（ViabilitybyTrypanBlueExclusion）

　　细胞检测：细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌

　　BV173人外周血B细胞系流程请严格遵照无菌操作

　　1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml0.25%yi酶进行消化细胞注意把握消化时间，通常控制在1-2min

　　2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉yi酶，加6-8ml*培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散

　　3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的*培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养

　　4、注意培养基PH值变化情况，定期换液每周2-3次，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存

　　特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养

　　1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，原瓶培养基的继续使用时间长不宜超过72小时

　　2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养

　　3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。培养条件："详见细胞说明书

　　传代方法：建议1:2-1:3两天换液一次

　　冻存条件：详见细胞说明书

　　主要文献：请具体查阅相关发表文章

　　细胞接收操作说明：请仔细阅读本操作说明及相应的细胞说明书。

　　本公司细胞发货有四种形式：T25培养瓶(一般是贴壁细胞使用，悬浮细胞也可以)、离心管(悬浮细胞使用多，当然，有些公司也会用这种离心管形式发贴壁细胞，但是，长期经验来说，贴壁细胞容易发生形态变化，BV173人外周血B细胞估计是细胞培养空间狭小，血清不足导致(主要是怕运输延误导致这些情况发生)，个人不建议用离心管形式发贴壁细胞)及干冰(冻存细胞用，主要是冬天天气冷，温度低于4℃的地方，都要考虑冻存细胞)。

　　T25培养瓶：是用T25细胞培养瓶直接发货的形式。收到细胞后，拆开包装T25培养瓶的自封袋，不拆封口膜，表面喷75%酒精消毒后显微镜观察细胞状态（有条件可以拍下此时细胞照片）。将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用，如细胞密度高于80%，可以直接消化传代，相反则加入5-6ml培养基放回培养箱继续培养即可。

　　离心管：是用15ml离心管发货的形式，只用于悬浮细胞发货。收到细胞后消毒处理及将细胞放入37度培养箱平衡两小时以上，再处理细胞。首先将T25中培养基取出装好备用(如果实验室没有T25培养瓶，可以暂时T75培养瓶，加入10-15ml培养基,，建议10ml培养基，也可以使用T175培养瓶，加入50-60ml培养基，培养瓶越大，需要的培养基越多。当然如果刚接收到细胞密度不够的话，先不要用大瓶子，先用小瓶子养起来再换大的，不然会长得很慢，严重的，会导致细胞死亡等危险)，平衡完成后，离心（1000rpm，3min）收集细胞，弃上清，用新的培养基重悬细胞并接种至培养瓶或皿中，放回培养箱继续培养。

　　干冰：是用本公司冻存液冻存细胞后，直接用干冰将冻存的细胞冷冻发货的形式。收到细胞后按照细胞复苏的步骤操作即可。

　　接收细胞相关问题：如不能在收到细胞后及时操作细胞，T25及离心管发货的细胞将可以消毒后在37度过夜，血清发货的细胞在室温下静置1-2天（注意不要放冰箱），干冰发货的可以在确认干冰未*升华时将细胞直接放回液氮或者-80度冰箱，若干冰*升华，请即刻复苏细胞。

　　T25瓶及离心管在培养箱平衡是为了让细胞尽快适应培养箱环境，同时使部分因运输导致脱落的细胞贴壁，此步骤非常必要。T25瓶如果在显微镜下可以看到部分不贴壁的细胞，可以收集上清后离心（1200rpm，5min）后，将沉淀用新的培养基重悬后接种至新的培养瓶或皿中。

　　部分细胞在运输过程中，由于不断震荡及环境不适，可能导致细胞破碎死亡，从而使培养基中漂浮很多细胞碎片及颗粒状物质。这种情况下，平衡后，贴壁细胞用PBS洗两遍再加新的培养基培养或者传代至新瓶中培养即可；悬浮细胞可以离心（1000rpm，3min）收集细胞，并用PBS重悬后再离心一次，再用新的培养基重悬并接种细胞。

　　上海文韧生物相关细胞代号如下，欢迎咨询，下单：

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