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LX-2人肝星状细胞

简要描述:

对试剂的要求血清好坏是关键,国产的真的效果不太好啦。建议有条件的尽量买进口的,切记要找一级代理购买,可以去网上鉴别真伪,我们实验室上次购买的国外很著名的血清,居然查不到批号,结果我们直接换代理公司。推荐几个比较不错的血清厂家Gibco、Hyclone、BI(不是打广告)。LX-2人肝星状细胞

产品时间:2021-12-18

访问量:121

厂商性质:经销商

  如何养出状态好、形态正常的细胞保种新买到的细胞一定要多保种几支,以免玉石俱焚。有些细胞对传代数有要求,所以保种弥足珍贵,这样一旦你养的状态不好了,可以复苏新的。

  LX-2人肝星状细胞(含str)

  1)来源:详细资料请咨询上海文韧生物

  2)含量:1x106个/mL

  3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

  4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

  气相:空气,95%;CO2,5%

  对试剂的要求血清好坏是关键,国产的真的效果不太好啦。建议有条件的尽量买进口的,切记要找一级代理购买,可以去网上鉴别真伪,我们实验室上次购买的国外很著名的血清,居然查不到批号,结果我们直接换代理公司。推荐几个比较不错的血清厂家Gibco、Hyclone、BI(不是打广告)。血清开盖后建议分装储存,以防反复冻融(小窍门:可以分装到若干个50ml和10ml的EP管中,配置培养基时正好每500ml一瓶的培养基中加入一管50ml和一管10ml的血清,即可配成10%血清的培养基)。有的血清在融化后会有析出,建议一定要离心,去除杂质后再配置培养基,不然养出的细胞看着背景不干净。LX-2人肝星状细胞

  另:自配溶液一定要用超纯水配置。

  加快增殖

  细胞较少时,会长的比较慢,往往越往后会群集性生长,导致接触抑制(竞争抑制),抑制了增殖速率,状态也较差。此时可以将其消化处理,然后重铺于新换的培养瓶培养,会收到很好的效果。当然也可以适当提高一点血清浓度,促进生长,但通常不建议这样长期培养。人肝星状细胞

  降低对细胞的刺激

  养细胞要比对待女朋友更贴心,培养基以及血清浓度要根据细胞网站的说明书选择;培养基、胰酶、PBS使用前均需在水浴锅37°C预热,这样可以减少对细胞的刺激,利于其保持状态。一些正常组织的细胞(非改造过的)不仅生长缓慢,而且非常脆弱,除了上面说的适宜的培养环境、试剂预热外,还要降低胰酶浓度,以减少对细胞的损伤。消化时间也要特别注意,尽量在细胞收缩而未脱落时终止消化,然后将细胞吹打下来。

  要根据细胞特性因地制宜,如令很多人头疼的RAW264.7细胞,不当处理或者传代太多都会导致其分化、长出伪足,所以除了初期保种外,细胞传代不要用胰酶消化,直接用枪吹打下来即可,这样可以降低损伤。

  去除“杂质"

  细胞经常会养着养着就有很多“杂质"(如图,有可能是代谢物、细胞碎片),尤其是时间久远的细胞,这个时候就会影响它的状态和美感,那么如何去除这些“杂质"呢?

  个人经验,屡试不爽。首先弃掉培养基,PBS多洗几遍,如果你的细胞贴壁比较牢固,或者活的比较坚强,那你可以使用没有预热的PBS(冰箱取出,室温放置10min),这样使细胞稍微收缩,暴露出这些“杂质";加入胰酶消化处理,此时在镜下观察,这些“杂质"会优先于细胞漂起来,然后及时弃掉胰酶,此时观察细胞状态,如果贴壁还是相当牢固,可以在加入胰酶再消化,重复上述操作。加入培养基终止消化,将细胞吹打下来,转入EP管中。1000rpm离心4min。弃上清,再加入PBS,吹打均匀,再离心,视情况可以重复2遍,然后将细胞加入新的培养瓶中继续培养。这样可以明显减少“杂质"的存在。

  


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