LX-2人肝星状细胞

　　如何养出状态好、形态正常的细胞保种新买到的细胞一定要多保种几支，以免玉石俱焚。有些细胞对传代数有要求，所以保种弥足珍贵，这样一旦你养的状态不好了，可以复苏新的。

　　LX-2人肝星状细胞（含str）

　　1）来源：详细资料请咨询上海文韧生物

　　2）含量：1x106个/mL

　　3）污染：支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

　　4）规格：T25瓶或者1mL冻存管包装

　　气相：空气，95%；CO2，5%

　　对试剂的要求血清好坏是关键，国产的真的效果不太好啦。建议有条件的尽量买进口的，切记要找一级代理购买，可以去网上鉴别真伪，我们实验室上次购买的国外很较有名的血清，居然查不到批号，结果我们直接换代理公司。推荐几个比较不错的血清厂家Gibco、Hyclone、BI（不是打广告）。血清开盖后建议分装储存，以防反复冻融（小窍门：可以分装到若干个50ml和10ml的EP管中，配置培养基时正好每500ml一瓶的培养基中加入一管50ml和一管10ml的血清，即可配成10%血清的培养基）。有的血清在融化后会有析出，建议一定要离心，去除杂质后再配置培养基，不然养出的细胞看着背景不干净。LX-2人肝星状细胞

　　另：自配溶液一定要用超纯水配置。

　　加快增殖

　　细胞较少时，会长的比较慢，往往越往后会群集性生长，导致接触抑制（竞争抑制），抑制了增殖速率，状态也较差。此时可以将其消化处理，然后重铺于新换的培养瓶培养，会收到很好的效果。当然也可以适当提高一点血清浓度，促进生长，但通常不建议这样长期培养。人肝星状细胞

　　降低对细胞的刺激

　　养细胞要比对待女朋友更贴心，培养基以及血清浓度要根据细胞网站的说明书选择；培养基、胰酶、PBS使用前均需在水浴锅37°C预热，这样可以减少对细胞的刺激，利于其保持状态。一些正常组织的细胞（非改造过的）不仅生长缓慢，而且非常脆弱，除了上面说的适宜的培养环境、试剂预热外，还要降低胰酶浓度，以减少对细胞的损伤。消化时间也要特别注意，尽量在细胞收缩而未脱落时终止消化，然后将细胞吹打下来。

　　要根据细胞特性因地制宜，如令很多人头疼的RAW264.7细胞，不当处理或者传代太多都会导致其分化、长出伪足，所以除了初期保种外，细胞传代不要用胰酶消化，直接用枪吹打下来即可，这样可以降低损伤。

　　去除“杂质"

　　细胞经常会养着养着就有很多“杂质"（如图，有可能是代谢物、细胞碎片），尤其是时间久远的细胞，这个时候就会影响它的状态和美感，那么如何去除这些“杂质"呢？

　　个人经验，屡试不爽。首先弃掉培养基，PBS多洗几遍，如果你的细胞贴壁比较牢固，或者活的比较坚强，那你可以使用没有预热的PBS（冰箱取出，室温放置10min），这样使细胞稍微收缩，暴露出这些“杂质"；加入胰酶消化处理，此时在镜下观察，这些“杂质"会优先于细胞漂起来，然后及时弃掉胰酶，此时观察细胞状态，如果贴壁还是相当牢固，可以在加入胰酶再消化，重复上述操作。加入培养基终止消化，将细胞吹打下来，转入EP管中。1000rpm离心4min。弃上清，再加入PBS，吹打均匀，再离心，视情况可以重复2遍，然后将细胞加入新的培养瓶中继续培养。这样可以明显减少“杂质"的存在。