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skov-3人卵巢腺癌细胞(通过str)

简要描述:

skov-3人卵巢腺癌细胞(通过str)
1)来源:详细资料请咨询上海文韧生物
2)含量:1x106 个/mL
3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
气相:空气,95%;CO2,5%

产品时间:2020-03-17

访问量:110

厂商性质:经销商

skov-3人卵巢腺癌细胞(通过str)

细胞名

 skov-3人卵巢腺癌细胞(通过str)

种属

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养ye去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换ye以及传代,一般2天换一次ye

2.待细胞长满瓶底面积80%,需要对其进行传代,传代比例为1:2到1:3

3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化ye置于室温预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于室温孵育消化(首次次消化需置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移ye枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬ye,1000rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。(具体根据随货说明书进行操作)

保存

冻存条件:完全培养基+FBS+DMSO

(备注:建议使用本公司的培养条件,用4度保存的冷冻ye直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:yedan存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂,培养ye有漏ye:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)

3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养ye培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养ye继续培养,中间注意观察,

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 巨噬细胞分离方法

 

  1. 取6周左右的小鼠(或600克左右的豚鼠,或3公斤左右的家兔),剃去腹部的毛并消毒。腹腔注射1ml(豚鼠20ml,家兔200ml)无菌的ye体石蜡或巯基乙酸肉汤或4%淀粉肉汤。3~4天以后收集腹腔细胞。

2、如要收集腹腔静置巨噬细胞,不注射刺激物,直接从一步开始。放血处死动物,以减少腹腔中的红细胞。消毒腹部,沿腹中线注入3~4ml(豚鼠20~40ml,家兔50~70ml)冰中预冷的无菌PBS-H(含10U/ml肝素和10%小牛血清的PBS)。轻轻按腹部5分钟。

3、以下均无菌操作。剪开腹壁,用吸管吸出渗出ye,再用同样容量的预冷PBS-H冲洗腹腔2~3次。合并渗出ye于离心管中,4℃离心250×g10分钟,去上清ye

4、用预冷的RPMI-1640培养ye洗涤细胞3次,每次4℃离心250×g10分钟,去上清ye。用预冷的适量RPMI-1640培养ye悬浮细胞,台盼蓝染色计数细胞并决定细胞活力。

巨噬细胞的分离和纯化

1、取2~3公斤重的家兔,耳缘静脉注射10ml空气处死动物或注射2ml(含130mg)戊巴比妥麻醉动物。仰卧固定,消毒胸部,剪开胸壁。以下过程注意无菌操作。小心从环状软骨下方剪下气管,分离心脏和血管,取出肺,剪去脂肪和结缔组织。用无菌纱布小心擦净肺表面,称重。

2、分离肺泡巨噬细胞:用夹子夹住气管,使肺悬空。向气管中注射40ml无菌的冷生理盐水,让生理盐水进入全部肺泡。用镊子提起气管,从夹子下面剪断气管,将肺中的ye体倒入离心管中。再用同样方法,用40ml无菌冷生理盐水冲洗肺泡,合并浸出ye,置4℃。

3、分离肺组织中的巨噬细胞:取出肺泡巨噬细胞后,剪去气管,将肺组织放在有冷RPMI-1640培养ye的平皿中。平皿置冰上,用吸满冷RPMI-1640培养ye的20ml注射器接23号针头,一边灌注一边用针头梳离肺组织,直到肺组织与支气管树全部分离。使肺组织通过00目的钢丝网,分离单细胞。

4、以下过程均在4℃中进行。分别处移动图片理肺泡巨噬细胞和肺组织中的巨噬细胞:离心200×g10分钟,去上清ye。轻弹试管,悬浮细胞,加入10ml低渗ye(20mmol/LTris,0.75%氯化铵,pH7.4),37℃处理3~5分钟,溶解红细胞。红细胞通常分别占肺泡巨噬细胞和组织巨噬细胞的1%和10%。也可以不用低渗处理,直接在淋巴细胞分离ye上分离巨噬细胞。

5、离心200×g10分钟,去上清ye。用RPMI-1640培养ye洗涤细胞一次。将细胞悬ye加在淋巴细胞分离ye(比重1.077)上,离心400×g20分钟,收集交界面的巨噬细胞。弃去沉淀的死细胞和红细胞。

6、用RPMI-1640培养ye洗涤巨噬细胞2次。台盼蓝染色检测细胞活力和细胞数,将细胞配成所需浓度。此时巨噬细胞活力可达90%以上,巨噬细胞占全部细胞的90%以上。

 

 

 

 

 

1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏ye情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废zui及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5.客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以咨询技术电话,我们随时给予解答。

上海文韧生物科技有限公司

 

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