传代密度过低
哺乳动物贴壁培养细胞,若细胞培养到80-90%密度需要开始传代,在传代接种细胞密度过低,细胞间距离太远,就无法在细胞间产生黏附及通信作用,帮助信号传导并活化细胞;总体细胞量不足,分泌的生长因子浓度会不足以产生利于生长的微环境,以上皆会造成增殖速度迟缓或细胞死亡。
解决方案:
细胞传代时,要进行准确的细胞计数,确保铺盘的密度。
如何确定细胞的正确初始接种密度? 美国细胞库(ATCC)建议各类不同细胞株接种密度:
细胞类型 | 接种密度 |
常见肿瘤细胞株 | 2-4 x 106 viable cells/25cm2 |
成纤维细胞株 | 2-4 x 106 viable cells/25cm2 |
淋巴细胞/悬浮细胞 | 3-4 x 105 viable cells/ml |
杂交瘤 | 2 x 105 viable cells/ml |
成肌细胞 | 1-2 x 104 viable cells/cm2 |