配制SH30022.01培养基之生长测试

发布日期：2020-10-09      浏览次数：622

配制培养基之生长测试
材料：
1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
2. 6-well TC plate (or 35 mm TC dish)
3. methanol
4. glacial acetic acid
5. 10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)

步骤：
1. 以待测试培养基培养MDCK cell，接种MDCK 细胞于6-well plate (或35 mm TC dish) 中，每个well 接种1 × 102 活细胞，同时作对照组实验。
2. 接种5～7 天后，在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长，待细胞群 落大到可以肉眼观察，而群落间不互相接触时即可。
3. 去除培养基，加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇：冰醋酸﹦ 3:1)，室温下静置10 min。
4. 去除固定液，水洗二次。
5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution，，室温下静置染色2-3 min。
6. 去除染液，水洗二次。
7. 以肉眼计数群落数，并比较之，若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳，则丢弃之。