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配制SH30022.01培养基之生长测试

  • 发布日期:2020-10-09      浏览次数:31
    • 配制培养基之生长测试
      材料:
      1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
      2. 6-well TC plate (or 35 mm TC dish)
      3. methanol
      4. glacial acetic acid
      5. 10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)

      步骤:
      1. 以待测试培养基培养MDCK cell,接种MDCK 细胞于6-well plate (或35 mm TC dish) 中,每个well 接种1 × 102 活细胞,同时作对照组实验。
      2. 接种5~7 天后,在100 倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长,待细胞群 落大到可以肉眼观察,而群落间不互相接触时即可。
      3. 去除培养基,加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇:冰醋酸﹦ 3:1),室温下静置10 min。
      4. 去除固定液,水洗二次。
      5. 加入1 ml 10 % Giemsa solution,,室温下静置染色2-3 min。
      6. 去除染液,水洗二次。
      7. 以肉眼计数群落数,并比较之,若新配制或新批号的培养基对细胞生长不佳,则丢弃之。  
       

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