关于Trizol的一些问题解答

发布日期：2020-07-01      浏览次数：2102

一：RNA降解

A．组织取出后没有马上处理或冷冻；细胞生长过度

B．样品或提取的RNA沉淀保存于-5－-20℃，未在-60－-70℃保存。

C．细胞在胰酶处理时被破坏或匀浆中组织或细胞成分未*分散，样品中RNA酶未*灭活。。

D．溶液或离心管未经RNase去除处理。Tip头、离心管、贮存管受RNA酶污染。

E．电泳时使用的甲酰氨pH低于3.5

F．样品存放时间太长，裂解液中b-ME不足；

二：DNA污染

A：操作不规范

B．样品中含有组织溶剂（如乙醇，DMSO等），强缓冲液或碱性

溶液。

C．样品匀浆时加的试剂体积太少或样品量太多，污染有机物和中

间相。

D：在转录特别活跃的细胞破碎过程中，由于某种原因一部分mRNA与DNA、蛋白质形成了聚合体的形式.Trizol不能分离这种聚合体，从而造成了在所提取的RNA中有少量基因组DNA的污染.在这种情况下可以用无RNAse的DNAse处理，Trizol再次抽提或蛋白酶K消化后再用酸性苯酚抽提。
 

三：蛋白和多糖污染

离心去上清后得到的RNA沉淀经以下操作应可去除这些污染：在上一步中，每使用1ml Trizol，在水相中加0.25ml异丙醇和0.25ml高盐溶液（0.8M柠檬酸钠和1.2 NaCl）。混合，离心，然后按照操作进行。这种方法可使蛋白多糖和多糖留在溶液中，而沉淀出纯RNA。从植物中提取RNA时，应在匀浆后离心，并加上以上操作步骤。