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Trizol疑难解答

  • 发布日期:2020-07-01      浏览次数:198
    • 一:低得率

      A:样品裂解或匀浆处理不彻底;匀浆不完全时,基因组DNA分子仍然很大,溶液粘稠。变性的蛋白质和基因组DNA一起形成絮状凝集物容易包裹RNA,使之不能有效地释放到溶液中。

      B:沉淀不完全:从小于≤2×105动物细胞、≤2 mg动物组织或RNA含量低的样品中提取RNA时,匀浆体积太大,将造成RNA过分稀释而不能有效地沉淀下来。当从这样的样品中提取RNA时,应按比例减少抽提溶液,异丙醇沉淀后延长冰浴和离心时间,具体实验参数见相应操作步骤。加入少量糖原可提高RNA产量又不影响RT-PCR。

      C:z后得到的RNA沉淀未完全溶解

      二:A260/A280<1.65

      A.检测吸光度时,RNA样品不是溶于TE,而是溶于水。低离子浓度和低pH条件下,A280值会较高。

      B.样品匀浆时加的试剂量太少。

      C.匀浆后样品未在室温放置5分钟。

      D.水相中混有有机相。

      E.z后得到的RNA沉淀未完全溶解。

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