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TRIzol试剂使用时须注意的事项

  • 发布日期:2020-06-29      浏览次数:156
    • 警告:

      TRIzol试剂与皮肤接触及吞咽有毒。可导致烧伤。与皮肤接触后,应立即用洗涤剂和大量清水冲洗。如感到身体不适,应就医(如需要,请出示本产品标签)。本产品含有苯酚和其他成分。已经证明TRIzol?在室温下可稳定保存12个月。但我们建议在储存于2-8°C,以保证佳性能。

      性能描述:

      TRIzol试剂(美国号,5346994)是即用型细胞或组织总RNA提取试剂。该试剂是利用苯酚和异硫氰酸胍一步完成提取RNA的方法,是对Chomczynski和Sacchi开发的单步RNA提取法的改善。在匀质化或裂解样品中,TRIzol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞并溶解细胞成分。加入氯Fang离心后,溶液分离成水相和有机相。仅RNA存在于水相中。将水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。移去水相后,样品中DNA和蛋白质可通过相继沉淀回收。用乙醇沉淀可从中间相得到DNA,加入异丙醇沉淀可从有机相得到蛋白质。

      此技术既可良好的应用于少量组织(50-100mg)和细胞(5×106),也可用于大量的组织(≥1g)和细胞(>107)的处理,组织和细胞不限于人、动物、植物或细菌。TRIzol试剂使用简单方便,可同时处理大量样本。整个过程可在一小时内完成。用TRIZOL提取总RNA可避免蛋白质和DNA污染。提取的RNA可用于Northern?blot分析、斑点杂交、poly(A)+选择、体外翻译、RNA酶保护分析和分子克隆。

      TRIzol试剂方便提取不同种类、不同分子大小的RNA。例如,从大鼠肝中提取RNA,经琼脂糖凝胶电泳和溴化乙锭染色,高分子量RNA离散带长度可高达7kb和15kb,(组成mRNA’s和hnRNA’s),两个主要的核糖体RNA带在~5kB(28S)和~2Kb(18S)。低分子量RNA介于0.1和0.3kB之间(tRNA,5S)。分离出的RNA用TE稀释,其A260/A280比值≥1.8。

      防止RNA酶污染的注意事项

      在不当的技术操作过程中,RNA酶可在任何提取程序中意外引入RNA的制备中。由于酶的活性难以抑制,所以必须防止其引入。进行RNA工作时,下列准则应予以遵守。

      ①一直戴着手套。皮肤上通常包含的细菌和霉菌,可污染RNA的制备,同时也是RNA酶的一个来源。良好的微生物操作技术可防止微生物污染。

      ②使用无菌制品,专为RNA工作准备的一次性塑料器皿和自动吸管避免与共用设备的RNA酶交叉污染。例如,一个实验室正在使用的RNA探针可能用得上RNA酶A或RNA酶T1以减少过滤背景,其中任何非一次性物品(如自动吸管)可能是大量RNA酶的来源。

      ③TRIzol试剂可保护RNA酶对RNA的污染。下游样品处理要求非一次性的玻璃器皿或塑料器皿无RNA酶。玻璃物品可以在150℃烘烤4小时,塑料制品,可浸泡10分钟的0.5?M?NaOH溶液,然后用清水彻底冲洗,并高压蒸汽灭菌。

      其他需要注意的事项:

      ①用小于2毫升体积的TRIZOL试剂工作时,建议使用一次性透明聚丙烯管。

      ②对于较大的体积,用玻璃(Corex)或聚丙烯管,并测试以确保该管装满TRIzol试剂和氯Fang时可承受12,000×g的离心力,不要使用泄漏或有裂纹的管子。

      ③离心前平衡管子的重量

      ④玻璃管必须用封口膜密封,密封时封口膜要覆盖有螺丝处,聚丙烯管离心前必须盖好。

      警告:

      当使用TRIzol试剂工作时,应使用手套,并保护眼睛(屏蔽、安全护目镜)。避免与皮肤或衣服接触。使用化学通风橱。避免吸入蒸气。除非特别注明,所有程序均在15°C-30°C下进行。

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      名称            产地(货号)         规格

      TRIzol        15596-026        100ML

      TRIzol        15596-018        200ML

      蛋白酶K      Merch               100ML

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