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优势现货康宁优等胎牛血清35-076-CV 终产品血清质量

  • 发布日期:2020-04-21      浏览次数:258

    • 1)化学检定:渗透压
      pH
      蛋白含量——电泳法
      白蛋白 球蛋白 血红蛋白
      随着牛年龄增加血清中总蛋白含量相应增加,总的血清蛋白含量可以确定产品规格和年龄。
      2)微生物学检查:细菌、真菌符合USP标准。
      支原体:在支原体专业培养基上培养了3~4周,培养温度36℃±2℃
      分别在需氧和厌氧条件下进行,有的还需要在支原体琼脂培养m上传4次,Hoechst荧光素
      DNA 染色检查那些培养法
      无法检出的支原体如猪鼻支原体等。
      病毒检查:
      牛兰舌病毒 Bovin blue tongue
      牛腺病毒 Bovine Adenovirus
      牛细小病毒 Bovine Parvovirus
      牛病毒性腹泄病毒 Bovine Viral Diarhea Virus
      狂犬病病毒 Rabies
      呼肠弧病毒 Reovirus

      牛呼吸道合胞病毒 BRSVI
      副流感病毒III型 Parainfluenza
      检查方法:
      已证明无外源因子污染的牛细胞培养物,在细胞生长液中加15%待测血清,连传3代共21
      天。阴性对照细胞培养液
      中加 15%已知无病毒污染的牛血清,与试验组同条件下进行。在观察期内注意细胞形态变
      化或细胞病变。在观察
      期内第 14天待检样品和对照样品用标准病毒检测方法检查。
      如待检细胞培养物经胰酶消化后分种到6个含盖玻片的容器内。阴性对照样品按同样方法。再将牛腹泄病毒、牛细小病毒、牛腺病毒、狂犬病毒和呼肠弧病毒分别加入待检培养物盖玻片容器内作为阳性对照,再培养7天,用荧光抗体技术进行检查。

      细胞病变或病毒引起的其他改变通过苏木精或伊红染色进行观察。取另外一个待检细胞培养
      瓶用人“O”红细胞、
      豚鼠红细胞和新鲜鸡红细胞作血球吸附病毒检查。试验在2~8℃和20~24进行。阴性对
      照细胞预先感染副流感
      Ⅱ型病毒作为阳性对照。未感染的细胞作为阴性对照。
      3)内毒素检测
      用鲨试剂检查。
      4)细菌噬菌体检查
      主要检查 E.Coli(C300 or K-12骗菌体。
      5)激素含量测定
      每批FBS对某些激素含量都要进行测定,包括:雌二醇、胰岛素、孕酮、墨丸素、甲状腺
      素等。

      6)血红蛋白检测
      血红蛋白与氧合血红蛋白的比≥70%,血红蛋白含量≤mg15/dl。
      7)细胞生长效果测定
      a.细胞克隆效果测定
      细胞选择:Sp20/Ag-14 或 P3X63-Ag8.653
      血清浓度与细胞数:
      10%血清/1个细胞/孔
      4%血清/5个细胞/孔
      细胞培养基 RPMI-1640, 96 孔培养盘 36℃±2,5%二氧化碳培养 10~
      15天。试验中选择一个已知参考牛血清作对照。
      克隆效率计算:
      克隆效率=(阳性孔平均数/ 培养孔总数) X100%
      相对克隆效率=待测血清克隆效率/参考血清克隆效率
      b.贴壁效率试验:
      用人的传代细胞作每批血清的贴壁效率试验,A549(人肺癌细胞)该细胞可以反应出低浓度血

      清的贴壁变化。采
      用6孔培养盘每批血清用两种浓度和两种不同的细胞接种数即10%血清一—100细胞/孔,
      4%血清 200介细胞/孔
      。放36℃±2℃,湿润5%二氧化碳培养箱培养10~14天,计算着色细胞克隆,确定贴壁效
      率。从这两种不同血清
      浓度来确立实验血清支持细胞贴壁生长的水平,分析两种试验条件下平均贴壁效率。
      贴壁效率(%)=(每孔克隆平均数/ 每孔活存的培养细胞平均数) X100%
      相对贴壁效率=被测血清贴壁效率/参考血清贴壁效率
      c. 二倍体纤维细胞促生长试验
      人二倍体细胞株 WI28 MRc5
      25cm2细胞培养瓶,5%血清,每瓶接种1.5X105细胞连传3代,每代血清浓度和接种细胞
      数相同,每代培养7天,每
      代接种二个细胞瓶,36℃±2℃培养。以同样条件用已知参考血清进行平行培养。每代收获
      细胞计数,计算每批待
      检血清与参考血清的相对生长率(RGR)。
      RGR=(试验血清每瓶细胞平均数/ 参考血清每瓶细胞平均数) X100%

      牛血清主要质量要求(Sigma)
      胎牛血清 新生牛血清 成牛血清
      牛龄 胎 10~14天 <10个月
      无菌
      病毒
      支原体
      噬菌体
      内毒素(ng/ml)≤1.0 ≤10.0 ≤10(15)
      血红蛋白(g%) 3.0 4.5 3.5~6.0 5.0-8.5
      pH 6.7-8.0 7.0~8.0 7.0-8.0
      渗透压(mom/Kg H2O) 240-340 240-340 240~340

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