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B16小鼠黑色素瘤细胞通过str

简要描述:

B16小鼠黑色素瘤细胞通过str
1)来源:详细资料请咨询上海文韧生物
2)含量:1x106 个/mL
3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
气相:空气,95%;CO2,5%

产品时间:2020-04-02

访问量:72

厂商性质:经销商

B16小鼠黑色素瘤细胞通过str

细胞名称

B16小鼠黑色素瘤细胞通过str

种属

小鼠

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养ye去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换ye以及传代,一般2天换一次ye;

2.待细胞长满瓶底面积80%,需要对其进行传代,传代比例为1:2到1:3;

3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化ye置于室温预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于室温孵育消化(首次次消化需置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移ye枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬ye,1000rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。(具体根据随货说明书进行操作)

保存

冻存条件:完全培养基+FBS+DMSO

(备注:建议使用本公司的培养条件,用4度保存的冷冻ye直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:yedan存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂,培养ye有漏ye:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)

3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养ye培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养ye继续培养,中间注意观察,

 

新买到的细胞一定要多保种几支,以免玉石俱焚。有些细胞对传代数有要求,所以保种弥足珍贵,这样一旦你养的状态不好了,可以复苏新的。

对试剂的要求

血清好坏是关键,国产的真的效果不太好啦。建议有条件的尽量买进口的,切记要找一级代理购买,可以去网鉴别真伪,我们实验室上次购买的国外很著名牌子的血清,居然查不到批号,结果我们直接封了代理公司。推荐几个比较不错的血清厂家Gibco、Hyclone、BI(绝对不是打广告)。血清开盖后建议分装储存,以防反复冻融(小窍门:可以分装到若干个50ml和10 ml的EP管中,配置培养基时正好每500ml一瓶的培养基中加入一管50 ml和一管10ml的血清,即可配成10%血清的培养基)。有的血清在融化后会有析出,建议一定要离心,去除杂质后再配置培养基,不然养出的细胞看着背景不干净。

另:自配溶液一定要用超纯水配置。

加快增殖

细胞较少时,会长的比较慢,往往越往后会群集性生长,导致接触抑制(竞争抑制),抑制了增殖速率,状态也较差。此时可以将其消化处理,然后重铺于新换的培养瓶培养,会收到很好的效果。当然也可以适当提高一点血清浓度,促进生长,但通常不建议这样长期培养。

降低对细胞的刺激

养细胞要比对待女朋友更贴心,培养基以及血清浓度要根据细胞网站的说明书选择;培养基、胰酶、PBS使用前均需在水浴锅37°C预热,这样可以减少对细胞的刺激,利于其保持状态。一些正常组织的细胞(非改造过的)不仅生长缓慢,而且非常脆弱,除了上面说的适宜的培养环境、试剂预热外,还要降低胰酶浓度,以减少对细胞的损伤。消化时间也要特别注意,尽量在细胞收缩而未脱落时终止消化,然后将细胞吹打下来。

要根据细胞特性因地制宜,如令很多人头疼的RAW264.7细胞,不当处理或者传代太多都会导致其分化、长出伪足,所以除了初期保种外,细胞传代不要用胰酶消化,直接用枪吹打下来即可,这样可以降低损伤。

上海文韧生物科技有限公司

 

 

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