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MLE-12小鼠肺泡上皮细胞(通过str)

简要描述:

MLE-12小鼠肺泡上皮细胞(通过str)
1)来源:详细资料请咨询上海文韧生物
2)含量:1x106 个/mL
3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
气相:空气,95%;CO2,5%

产品时间:2020-03-31

访问量:108

厂商性质:经销商

 

MLE-12小鼠肺泡上皮细胞(通过str)

细胞名

MLE-12小鼠肺泡上皮细胞(通过str)

种属

小鼠

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养ye去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换ye以及传代,一般2天换一次ye;

2.待细胞长满瓶底面积80%,需要对其进行传代,传代比例为1:2到1:3;

3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化ye置于室温预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于室温孵育消化(首次次消化需置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移ye枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬ye,1000rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。(具体根据随货说明书进行操作)

保存

冻存条件:完全培养基+FBS+DMSO

(备注:建议使用本公司的培养条件,用4度保存的冷冻ye直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:yedan存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂,培养ye有漏ye:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)

3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养ye培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养ye继续培养,中间注意观察,

原代细胞培养之分离注意事项

1、组织块培养法

(1)组织块接种后的前3天,在观察和移动的过程中,注意不要引起液体的振荡。要避免经常翻动和振动,否则组织块不易附着于瓶壁上或附着后也会脱落飘起。

(2)加入的培养液不宜过多,避免浸泡的组织块受轻微的波动而脱落下来。

(3)当细胞向外迁徙出来后要注意记录并去除漂浮的组织块和残留的细胞,它们产生的有毒物质会影响原代细胞的生长。

(4)为促进组织块尽快粘贴在培养瓶皿上,可以在种植前先将胶原薄层涂在培养瓶底壁上。

2、贴壁型原代细胞

(1)原代培养的分离细胞在初次接触体外环境时,它们之间会互相影响,在这些细胞之间能产生一些促生长的活性物质,使细胞彼此互相促进存活和生长。如果接种的细胞密度过低,细胞之间的促生长作用很小,也很难使细胞适应从体内的组织环境到被分散后进入独立生存环境的变化过程。如果接种的细胞密度过大,会导致营养物质供应不足,代谢废物积累较快需要经常换液和传代。

(2)适当增大原代培养接种的细胞密度,给培养的细胞提供更多的类似于在体内时细胞之间的相互作用,会极大提高原代培养的细胞在体外存活率。待细胞适应体外环境后进行传代培养时再以较低的密度接种和培养。

(3)尽快使接种的细胞贴壁,是决定培养能否成功的关键。可以在接种后先将培养瓶置培养箱内培养3h到5h,待细胞贴壁后,再补足培养液继续培养。

上海文韧生物科技有限公司

 

 

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