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Ishikawa人子宫内膜癌细胞(通过str)

简要描述:

Ishikawa人子宫内膜癌细胞(通过str)
1)来源:详细资料请咨询上海文韧生物
2)含量:1x106 个/mL
3)污染:支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性
4)规格:T25瓶或者1mL冻存管包装
气相:空气,95%;CO2,5%

产品时间:2020-03-15

访问量:51

厂商性质:经销商

Ishikawa人子宫内膜癌细胞(通过str)

细胞名称

 Ishikawa人子宫内膜癌细胞(通过str)

种属

细胞来源

ATCC/中科院/协和医院等地引进

传代

1.用75%酒精喷洒整个培养瓶消毒,将其平躺置于培养箱中进行1-3小时的缓冲,.然后置于无菌操作台,打开瓶口,将其中的培养液去掉,再往其中加入5-6mL新鲜培养基(以T25培养瓶为例)并置于细胞培养箱中培养,根据细胞生长状况及培养基颜色变化对其进行换液以及传代,一般2天换一次液

2.待细胞长满瓶底面积80%,需要对其进行传代,传代比例为1:2到1:3

3传代步骤:将0.25%胰酶-0.53 mM EDTA消化液置于室温预热,倒掉培养瓶中的培养基,往培养瓶中加入3-5 ml PBS,轻晃洗涤后弃去。往瓶中加1-2 ml预热好的胰酶,置于室温孵育消化(首次次消化需置于显微镜下观察,以显微镜下细胞触角回收变圆、轻拍瓶壁见细胞脱落为zui佳消化时间,记录zui佳消化时间,以便于下次消化),消化好后加入3ml完全培养基终止消化。用移液枪轻轻吹打瓶壁上的细胞,使之完全脱落,然后收集细胞悬液,1000rpm离心3min,弃上清,加入完全培养基重悬细胞,进行传代。(具体根据随货说明书进行操作)

保存

冻存条件:完全培养基+FBS+DMSO

(备注:建议使用本公司的培养条件,用4度保存的冷冻液直接重悬细胞,不能预热后使用。)

保存条件:液氮存储

供应限制

仅供研究之用

常见问题及解决方案

1.培养瓶有破裂,培养液有漏液:细胞极大可能会污染,所以我们会及时安排帮老师解决。

2.收到细胞后尽快更换为含 10%血清的新鲜培养基,如因特殊情况需要继续使用原瓶培养基,请在原瓶培养基中额外添加 10%的血清(原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过 72 小时)

3.细胞漂浮:培养瓶不开封,瓶口酒精擦拭后平躺放置在培养箱。1-2小时后观察,如细胞大部分又贴回瓶底,表明细胞活力正常,剩余漂浮的细胞可以去掉,留8-10ml培养液培养观察,细胞生长至汇合度80%,进行消化传代;如细胞还是不贴壁,将细胞离心收集转到新培养瓶,原培养瓶加部分培养液继续培养,中间注意观察,

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细胞冻存和复苏实验

一般来说,细胞进行转移和保存,zui佳的策略是进行低温保存(-70℃~-196℃),而细胞深低温保存的基本原理是:在-70℃以下时,细胞内的酶活性均已停止,即代谢处于完全停止状态,故而可以长期保存。细胞低温保存的关键,在于通过0~20℃阶段的处理过程,在此温度范围内,冰晶呈针状,极易招致细胞的严重损伤。

经过前人的长期试验,发现细胞的冻存及复苏基本原则是慢冻速融,这样可以最大限度的保存细胞活力。目前细胞冻存多采用甘油或二甲基亚砜作保护剂,这两种物质能提高细胞膜对水的通透性,加上缓慢冷冻可使细胞内的水分渗出细胞外,减少细胞内冰晶的形成,从而减少由于冰晶形成造成的细胞损伤。

复苏细胞应采用快速融化的方法,这样可以保证细胞外结晶在很短的时间内即融化,避免由于缓慢融化使水分渗入细胞内形成胞内再结晶对细胞造成损伤。

材料准备

1.  仪器:净化工作台、 离心机、恒温水浴箱、冰箱(4℃、-20℃、-70℃)、倒置相差显微镜、培养箱、液氮冰箱。

2.  玻璃器皿:吸管(弯头、直头)、 培养瓶、玻璃瓶(250ml、100ml)、废液缸。

3.  塑料器皿: 吸头、枪头、胶塞、移液管(10ml)、15ml离心管、冻存管(1~2ml)。

4.  其他物品:微量加样枪、红血球计数板、记号笔、医用橡皮膏、移液枪。

5.  试剂:D-Hanks液、胎牛血清、培养液、双抗(青霉素、链霉素)、胰蛋白酶(0.08%)、1NHCl、7.4%NaHCO3、DMSO(分析纯)或无色新鲜甘油。

细胞冻存

1、10%的DMSO+90%胎牛血清。甘油一般用于菌种保存很少用于细胞冻存。

2、取对数生长期的细胞,用胰蛋白酶把单层生长的细胞消化下来,悬浮生长的细胞则直接将细胞移至15ml离心管中。

3、离心1000 rpm,5 min。

4、去除胰蛋白酶及旧的培养液,加入适量配制好的冻存培养液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀,计数,调节冻存液中细胞的最终密度为5x10^6/ml~1x10^7/ml。

5、 在冻存管上标明细胞的名称,冻存时间及操作者。

6、冻存:标准的冻存程序为降温速率-1~-2℃/min;当温度达到-25℃以下时,可增至-5℃~-10℃/min;到-100℃时,则可迅速浸入液氮中。也可将装有细胞的冻存管放入-20℃冰箱2h,然后放入-70℃冰箱中过夜,取出冻存管,移入液氮容器内。

细胞复苏

1.  从液氮容器中取出冻存管,直接浸入37℃温水中,并不时摇动令其尽快融化。

2.  从37℃水浴中取出冻存管,打开盖子,用吸管吸出细胞悬液,加到离心管并滴加10倍以上培养液,混匀。

3.  离心, 1000 rpm,5 min。

4.  弃去上清液,加入含10%小牛血清培养液重悬细胞,计数,调整细胞密度,接种培养瓶,37℃培养箱静置培养。

5.  次日更换一次培养液,继续培养。

 

 

 

1.收到细胞后,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

2.收到细胞先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时(视细胞密度而定)稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照(建议收细胞时就整体外观拍一张照片,观察培养基的颜色和是否有漏液情况,随后在显微镜下拍下细胞状态,100*,200*各一张),观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3.由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响,故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态,故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明,期间间隔时间不能大于7天。

4.所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性,必须在二级生物安全台内操作,并请注意防护,所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5.客户在细胞培养过程中,有任何技术问题可以咨询技术电话,我们随时给予解答。

上海文韧生物科技有限公司

 

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