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人的正常T细胞表达和分泌因子ELISA试剂盒

简要描述:

人的正常T细胞表达和分泌因子ELISA试剂盒文韧生物科技供应国内外知名品牌血清,试剂盒,胎牛血清,猪血清,马血清,新生牛血清,驴血清豚鼠血清,人血清,人AB血清,主要品牌有Hyclone,NTC,Gemini,SBI,PAN等,其中胎牛血清,囊括:普通胎牛血清,优等胎牛血清,炭吸附胎牛血清,透析胎牛血清,四环素胎牛血清,干细胞专用血清,超低IgG胎牛血清,热灭活胎牛血清等

产品时间:2020-04-20

访问量:70

厂商性质:经销商

人的正常T细胞表达和分泌因子ELISA试剂盒Human CCL5/RANTESELISA KIT  

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人的正常T细胞表达和分泌因子ELISA试剂盒Human CCL5/RANTESELISA KIT  

吸附试验

1.间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测抗体。以鸭病毒性肝炎(DVH)抗体的ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例,间接ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的操作程序如下。

(1) 材料

① 包被液、洗涤液、保温液、底物液、终止液;

② DVH包被抗原、酶标抗抗体、阴性及阳性DVH参考血清;待检鸭血清;

③ ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪、加样器、聚苯乙烯微量板。

(2) 方法步骤

① 加抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干

② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干

④ 加底物液 → 37℃ 30分钟,加终止液

⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值,并计算出P/N比值。

(3) 结果判定 已知阳性血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,而且已知阳性血清的OD值≥0.4;在上述条件成立的情况下,如果待检血清与已知阴性血清的比值(P/N)≥2.1,而且待检血清的OD值≥0.4,则判为阳性,否则判为阴性。

2.双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测大分子抗原。现以检测鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV)的双夹心抗体ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)为例介绍本法的操作程序。

① 加抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干

② 加待检抗原 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干

③ 加酶标抗体 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干

④ 加底物液 → 37℃ 15分钟,加终止液

⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

3.双夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 此法与双抗体夹心ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的主要区别在于:它是采用酶标抗抗体检查多种大分子抗原,它不仅不必标记每一种抗体,还可提高试验的敏感性。此法的基本程序为:

① 加抗体(Ab-1)包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干

② 加待检抗原(Ag) → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

③ 加用非同种动物生产的特异性抗体(Ab-2)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

④ 加入酶标抗Ab-2抗体(AB-3)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

⑤ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液

⑥ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

4.竞争ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 此法主要用于测定小分子抗原及半抗原,其原理类似于放射免疫测定。其基本程序为:

① 抗体包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干

② 加入待检抗原及一定量的酶标抗原(对照孔仅加酶标抗原)→ 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

③ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液

④ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

被结合的酶标抗原的量由酶催化底物反应产生有色产物的量来确定,如果待检溶液中抗原越多,被结合的标记抗原的量就越少,有色产物就减少,这样根据有色产物的变化就可求出未知抗原的量。此法的优点在于快速、特异性高、且可用于小分子抗原及半抗原的检测;其主要不足在于每种抗原都要进行酶标记,而且因为抗原的结构不同,还需应用不同的结合方法。此外,试验中应用酶标抗原的量较多。5.阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测型特异性抗体。该方法现已成为猪传染性胃肠炎(TGE)、猪伪狂犬病(PR)及猪胸膜肺炎(AP)的主要检测方法。下面以AP2型抗体的阻断ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测法为例介绍其操作程序:

① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃过夜,洗涤三次、抛干

② 用200μl阻断缓冲液进行封闭 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

③ 加工作量1:4稀释被检猪血清100μl → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分钟,洗涤三次、抛干

⑤ 加100μl工作量猪抗兔IgG-HRP → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

⑥ 加100μl OPD底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液

⑦ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

本试验同时设标准阴、阳性血清对照、兔抗AP2型阳性对照、空白对照。

6.抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒) 本法主要用于检测IgM抗体。由于IgM抗体出现于感染早期,所以检测出IgM,则可作为某种疾病的早期诊断。抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)根据所用标记方式不同可分为标记抗原、标记抗体、标记抗抗体捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)等几种,其中以标记抗原捕捉ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)比较有代表性,该方法的主要程序为:

① 用抗u链(抗IgM重链)抗体包被→37℃ 60分钟后置4℃过夜,洗涤三次、抛干

② 加待检血清 → 37℃ 2小时,洗涤三次、抛干

③ 加酶标抗原 → 37℃ 60分钟,洗涤三次、抛干

④ 加底物液 → 37℃ 20分钟,加终止液

⑤ 用ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)检测仪测定OD值。

7.斑点ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)(Dot-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)) 与常规的微量板ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)比较,Dot-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)具有简便、节省抗原等优点,而且结果可长期保存;但其也有不足,主要是在结果判定上比较主观,特异性不够高等。该方法的主要操作程序为:(1)载体膜的预处理及抗原包被 取硝酸纤维素膜用蒸馏水浸泡后,稍加干燥进行压圈。将阴性、阳性抗原及被检测抗原适度稀释后加入圈中,置37℃使硝酸纤维素膜彻底干燥。每张7cm×2.3cm的膜一般可点加40-53个样品,每个压圈可加抗原液1-20μl。

(2) 封闭 将硝酸纤维素膜置于封闭液中,37℃感作15-30分钟。封闭液多采用含有正常动物血清、pH7.2或pH7.4的PBS。

(3) 加被检血清 可直接在抗原圈上加,也可剪下抗原圈、置于微量板孔中,再加入一定量适度稀释的待检血清,37℃反应一定时间,用洗涤液洗三次,每次1-3分钟。洗涤液一般为一定浓度的PBS-Tween溶液。

(4) 加酶标抗体,37℃反应一定时间后,用洗涤液洗三次。

(5)显色加入新鲜配制的底物液,37℃反应一定时间后,去掉底物液,加蒸馏水洗涤终止反应。

(6) 结果判定 以阳性、阴险血清作为对照,膜片中央出现深棕红色斑点者为阳性反应,否则为阴性反应。

8.布ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)(C-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)) C-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)(Cloth-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒))是加拿大学者Blais, B. W.等于1989年建立的一种新型免疫检测技术。该方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即涤纶布为固相载体,这种大孔径的的疏水布具有吸附样品量大,可为免疫反应提供较大的表面积,提高反应的敏感性,且容易洗涤,不需特殊仪器等优点。其基本原理与Dot-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)类似,只是载体不同。以对布氏杆菌抗原的检测为例,C-ELISA(酶联免疫吸附试验,酶联免疫试剂盒)的主要程序为:

(1) 首先把抗布氏杆菌的血清包被(吸附)在聚脂布上,并经洗涤及封闭;

(2) 加被检样品并于室温下感作30分钟,然后洗5次;

(3) 加酶标记的抗布氏杆菌抗体,于室温下感作30分钟,然后洗涤5次;

(4) 加入底物液显色;

(5) 利用酶标仪测定OD值。

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