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肿瘤细胞的培养方法

  • 发布日期:2020-10-30      浏览次数:63
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      肿瘤细胞培养方法

      肿瘤细胞培养成功关键在于:取材、成纤维细胞的排除、选用适宜的培养液和培养底物等几个方面。在具体培养方法方面,肿瘤细胞培养与正常组织细胞培养并无原则差别,初代培养应用组织块和消化培养法均可。

      1.取材:

      人肿瘤细胞来自外科手术或活检瘤组织。取材部位非常重要,体积较大的肿瘤组织中有退变或坏死区,取材时尽量避免用退变组织,要挑选活力较好的部位。癌性转移淋巴结或胸腹水是好的培养材料。取材后宜尽快进行培养,如因故不能立即培养,可贮存于4℃中,但不宜栽过24小时。

      2.培养基:

      肿瘤细胞对培养基的要求不如正常细胞严格,一般常用的 RPMIl640、 DMEM、Mc-Coy5A等培养基等皆可用于肿瘤细胞培养。肿瘤细胞对血清的需求比正常细胞低,正常细胞培养不加血清不能生长,肿瘤细胞在低血清培养基中也能生长。肿瘤细胞对培养环境适应性较大,是因肿瘤细胞有自泌(Autocrine)性产生促生长物质之故。但这并不说明肿瘤细胞完全不需要这些成分。按不同细胞需要不同的生长因子;肿瘤细胞与正常细胞之间、肿瘤细胞与肿瘤细胞之间对生长因子的需求都存在着差异。但大多数肿瘤细胞培养中仍需要生长因子。有的还需特异性生长因子〔如乳腺癌细胞等)。总之培养肿瘤细胞仍需加血清和相关生长因子培养更易成功。

      3.成纤维细胞的排除:

      成纤维细胞常与肿瘤细胞同时混杂生长,致难以纯化肿瘤细胞。而且成纤维细胞常比肿瘤细胞生长得快,终能压制肿瘤细胞的生长。因此排除成纤维细胞成为肿瘤细胞培养中的关键。排除成纤维细胞有多种方法(表2-1)。

      表2-1 抑制成纤维细胞生长因素

      方法

      因素

      组织细胞

      选择性附着

      选择性附着底物


      汇合饲细胞层

      选择性培养基


       

      胰蛋白酶
      胶原酶
      聚丙烯酰胺
      聚四氟乙烯(Teflon)
      胶原(猪皮)
      小鼠3T3
      人胎小肠
      D-缬氨酸(Valine)
      MCDB-710
      MCDB-153
      Phenobarbitone

      胚胎小肠、心肌、表皮
      乳癌
      各种肿瘤
      转化细胞
      表皮细胞
      表皮
      正常和恶性乳腺上皮
      结肠癌
      肾组织
      乳腺
      表皮
      肝细胞


      注:上表结果为个别实验室经验,仅供参考 

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