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胎牛血清《S-FBS-SA-015》之生长测试

  • 发布日期:2020-10-10      浏览次数:85
    •        如今已经成为各大实验室“常客”的胎牛血清,是一种采集自新鲜的牛血液的优质血清。胎牛血清主要的作用就是提供基本的营养物质以及提供接触和伸展因子,有效避免细胞贴壁受到机械的损伤。如此看来胎牛血清确实发挥出非常大的作用,选择一款好的血清是尤为重要的。

      文韧今日推荐~德国SERANA胎牛血清S-FBS-SA-015(南美源)

      血清之生长测试 

      材料:
      1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
      2. a-MEM (alpha modified minimal essential medium, GibcoBRL 12000-022 )
      3. 6-well TC plate (or 35mm TC dish)
      4. methanol
      5. glacial acetic acid
      6. 10 % Giemsa solution(GibcoBRL 10092-013)
      步骤:
      1. 以a-MEM with 10 % FBS (已测试过) 培养MDCK 细胞于T75 flask 至80 % confluency。
      2. 以trypsin-EDTA 处理细胞,离心后,加入适量不加血清之a-MEM 制成细胞悬浮液,并测细胞浓度。以不加血清之a-MEM 稀释细胞浓度为1×102 活细胞数/ ml。
      3. 将1 ml 细胞悬浮液接种入6-well plate 中,并另加入1 ml 含不同浓度的血清(20 % , 10 % , 4 % , 2 % , 1 % , 0.4 %) 之a-MEM,使血清终浓度为10% , 5 % , 2 % , 1 % , 0.5 % , 0.2 %。用已测试过之血清同时进行对照组试验。
      4. 37 oC,5 % CO2 培养箱培养5-7 天,期间不需更换培养基,待细胞群落大到可以肉眼观察,而群落间不互相接触即可。
      5. 去除培养基,加入1 ml Carnoy’s 固定液(甲醇:冰醋酸﹦ 3:1),室温下静置10 min。
      6. 去除固定液,水洗二次。
      7. 加入1 ml 10 % Giemsa solution,,室温下静置染色2-3 min。
      8. 去除染液,水洗二次。
      9. 以肉眼计数群落数
      10. 计算SPE ( Serum Plating Efficiency ):SPE = ( no. of colonies / well ) / 100 x 100 %
      11. 计算RPE(Relative Plating Efficiency):SPE = [ total colonies of six well (test) / Total colonies of six well (control) ] x100 % 

      比较各浓度血清培养基之RPE,即可得知待测血清对细胞生长的影响。 

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