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【RBE人肝胆管癌细胞】冻存/复苏之如何掌握“慢冻快融”的原则

  • 发布日期:2020-09-24      浏览次数:283
    • 为保护您的细胞,上海文韧生物教您如何掌握细胞慢冻速融的原则

      慢冻快融

            冻存细胞过程,建议程序降温速度为1℃/min。细胞冻存时,细胞内外的水分会很快形成冰晶,冰晶的形成后会造成细胞损伤或细胞的死亡。为了保护细胞,冻存时会添加保护剂在冻存液中,目前多采用DMSO或甘油,使冰点下降,提高细胞膜对水的通透性。

           复苏细胞过程,让细胞冻管在37℃环境快速解冻,待其全部快速融化,避免冰晶对细胞造成伤害;解冻后的细胞可直接接种到含完全培养基的细胞培养瓶中进行培养,24小时后再更换新鲜完全培养液,以去除旧培养液中的DMSO; 如果担心DMSO造成细胞毒性,可以待细胞解冻后将细胞缓慢加至含培养基离心管中离心,以稀释DMSO的浓度。复苏的细胞,约需数日或传一至二代,其表现才会恢复稳定。

      解决方案:掌握“慢冻快融”的原则,进行程序降温
      慢冻→两种办法:

      1.手动程序降温,将细胞依序放在4℃(30分钟)、-20℃(1小时)、-80℃(过夜)后移至液氮中保存。

      2.程序降温盒,一般Guang泛使用的降温法,为一种特制冷冻容器(填充异丙醇或依靠特制金属导热),使细胞以每分钟约-1℃的速度降至-80℃(过夜),然后移至液氮中保存。

      快融:将冻存在液氮中的细胞冻存管快速移至已37℃预热的水浴锅中(水面需低于管口,避免水分意外进入冻存管造成潜在污染),使细胞冷冻悬液迅速融化;此做法能让细胞冷冻悬液快速通过-20℃~0℃这个结晶形成温度范围,避免冰晶进入细胞形成再结晶,对细胞造成二次伤害。

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