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小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(含STR)mc3t3 e1细胞怎么养?

  • 发布日期:2020-09-18      浏览次数:62
    • 小鼠胚胎成骨细胞前体细胞(MC3T3-E1)怎么养

      细胞中文名称:小鼠胚胎成骨细胞前体细胞

      细胞形态:成纤维细胞样

      细胞特性:贴壁

      培养条件:DMEM+10% FBS

      规格:T25/ml

      温度37°C

      空气条件5% CO2,95% AIR

      培养步骤:

      1、吸走用于培养基,加入 3-5mL PBS 后轻轻晃动培养瓶润洗细胞;

      2、吸干净 PBS 后加入 1mL 0.25%胰酶-0.53mM EDTA,轻轻摇晃培养皿使胰酶浸没细胞表面,培养瓶放 37 度培养箱消化;(细胞对于消化比较敏感,消化过度会严重影响细胞状态,导致细胞传代死亡漂浮或者传代后不长。细胞消化到细胞间隙变大但未脱落,可以轻轻吹下时即可终止,禁止消化到细胞完全漂浮。混匀细胞时尽量轻柔,不要吹出大量气泡。)

      3、加入 6-8ml 完全培养基终止消化,轻轻吹下细胞混匀;

      4、将混匀的细胞 1000rpm(约 150g)离心 3min,弃上清,再用新鲜培养基重悬 37 度培养箱继续培养;

      传代比例: 不同细胞生长速度不一,具体传代比例视细胞生长速度而定,大部分细胞适用
      1:3-1:4 传代,生长较慢的细胞可以 1:2 传代。


      冻存:
      1、冻存液:92%完全培养基+8%DMSO(可以根据实验室条件自行选择)

      2、降温步骤:4 度 10min,-20 度 2h,-80 过夜后液氮保存。


      运输及售后问题:
      1、细胞经过运输后,部分细胞由于温度变化及剧烈碰撞Si亡破碎形成碎片,是正常现象。贴壁细胞  可以消化,悬浮细胞直接混匀收集细胞,900-1000rpm(约 150g)离心 3min,弃上清。加5mlPBS 重悬细胞,再 900-1000rpm(约 150g)离心 3min,用新鲜的完全培养基重悬接种到新的培养瓶。第二次 PBS 重悬是为了去除碎片,如果平时碎片比较少,传代时可以省略 PBS 重悬的步骤;如果碎片很多,建议 PBS 多洗几次。

      2、细胞生长不均时,可以将细胞消化吹散后加入新的培养基重新接种或传代。

      3、细胞生长缓慢时,可以选择提高血清浓度培养(最Gao不超过 20%),也可以根据细胞生长状态, 选择传代细胞到新的培养瓶中继续培养。

      4、不同细胞贴壁性差异比较大,所以消化时间差别较大,20s-10min  均有可能,具体以细胞消化到相互分离但未脱落,并可以轻轻吹下为准,严禁消化到细胞完全漂浮。户消化过度导致细胞   死亡、漂浮、生长缓慢, 不提供免费售后服务。

      5、细胞状态正常时,应尽快冻存细胞保种,冻存后应随机抽取一支检测冻存效果。方不对客户 冻存细胞导致死亡负责, 客户冻存细胞死亡不提供免费售后服务。

      上海文韧生物科技有限公司

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