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kb细胞活力检测比色法检测的介绍

  • 发布日期:2020-09-14      浏览次数:149
    • MTT比色分析法是由Mosmann在1983年Shou创,其原理是活细胞内的线粒体中的琥珀酸脱氢酶可以将MTT[化学名为3-(4, 5-二甲基噻唑-2)-2, 5-二苯基四氮唑溴盐,外观淡黄色]还原成蓝紫色结晶甲臜,并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。二甲基亚砜 (DMSO) 能溶解细胞中的甲臜,溶液颜色的深浅与所含的甲臜量成正比。用酶标仪在570nm波长下测定OD值。MTT方法能简单、快捷、准确地测定细胞的增殖反应,而且能避免由于人为操作因素造成的试验误差,大大地提高了实验结果的准确性和重现性。MTT方法目前大多用于检测培养细胞的生长和增殖、新药筛选、细胞毒性试验、肿瘤细胞敏感性试验等。加之其价格低廉,成为日前各实验室榆测细胞活性的Shou选方法之一。

      但是MTT法不太适合于悬浮细胞,因为在溶解甲臜之前,需将培养液吸出,这一步很容易造成甲臜流失,因而导致实验结果偏差。若不去除培养基,培养基中的血清和酚红会影响实验结果。为了消除培养液中血清和酚红的影响,有人进一步提出改良的MTT法。即在不吸出培养基的前提下,利用一些有机溶剂,如酸化SDS、SDS-DMF酸性溶解液等直接溶解甲臜,都取得了不错的效果。

      对由于MTT的产物甲臜不溶于水的缺点,研究人员又开发了很多种水溶性的四氮唑盐类:如 XTT、CCK-8 (又称WST-8) 等。XTT和CCK-8都是新合成的四唑氮衍生物,与MTT属于同类物质,它们都能被活细胞中线粒体内的脱氢酶降解而产生棕黄色水溶性的甲臜,能直接通过光谱吸收测定OD值,进而推测细胞的增殖情况。当与电子耦合剂PMS联用时,还能增强其还原反应,提高反应的灵敏性。与MTT法比较可知,这些方法主要优点是反应产物为水溶性,不需要使用裂解液溶解沉淀,也不需要吸取上清,对贴壁和悬浮生长的细胞均适用,检测时间缩短和处理步骤减少,也大大提高了实验的敏感性。缺点就是成本较高,XTT水溶液不稳定,需要低温保存或现配现用;而CCK-8试剂的颜色为淡红色,与含酚红的培养基颜色接近,不注意的活容易产生漏加或多加。

      Promega CellTiter 96® AQueous One Solution Cell Proliferation Assay (MTS单溶液一步法细胞活力检测试剂盒)是一种比色法的新型细胞活力快速检测试剂。一步法操作,摆脱了传统MTT操作复杂问题,误差小,无需有机溶剂溶解,无需去除上清,活细胞检测等。

      -检测类型:吸收光(490nm)

      -检测标志物:线粒体脱氢酶

      -应用:细胞活力,细胞增殖,细胞毒性

      -细胞类型:细胞系,原代细胞(悬浮或贴壁)

      -检测步骤:一步法,均质检测

      -操作时间:1-4h

      -灵敏度:1000个活细胞(96孔板)

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