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U266细胞活力鉴定—台盼蓝染色法

  • 发布日期:2020-09-10      浏览次数:224
    • U266细胞活力鉴定——台盼蓝染色法

      原理: 

      细胞损伤或死亡时,台盼蓝可穿透变性的细胞膜,与解体的DNA 结合,使其着色。而活细胞能阻止染料进入细胞内。故可以鉴别死细胞与活细胞。  

      用品: 

      1. 4%台盼蓝母液:称取4g台盼蓝,加少量蒸馏水研磨,加双蒸水至100ml,用滤纸过滤,4度保存。使用时。用PBS稀释至0.4%。 2. 吸管、血细胞计数板、显微镜  

      步骤: 

      1、制备单细胞悬液。并作适当稀释(106 细胞/ml) 2、染色:细胞悬液与0.4%台盼蓝溶液以9:1混合混匀。 3、计数:在三分钟内,用计数板分别计数活细胞和死细胞  

      结果统计: 

      镜下观察,死细胞被染成淡蓝色,而活细胞拒染。 根据下式求细胞活力: 

      活细胞率(%)= 活细胞总数/(活细胞总数+死细胞总数)×100  

      注意事项:台盼蓝染细胞时,时间不宜过长。否则,部分活细胞也会着色,会干扰计数。

      台盼蓝染色原理 

      通常认为细胞膜丧失完整性,细胞即可被认为已经死亡。台盼蓝(Trypan Blue)是检测细胞膜完整性Chang用的生物染色试剂。健康的正常细胞能够排斥台盼蓝,而死亡的细胞,膜的完整性丧失,通透性增加,细胞可被台盼蓝染成蓝色。依据此原理,细胞经台盼蓝染色后,可通过显微镜,直接镜下计数或拍照后计数,实现对细胞存活率比较Jing确的定量分析。 

      试述台盼蓝染发鉴别死活细胞的原理,试分析染色时间过长本来是活细胞也被染色的原因  

      死细胞的细胞膜无屏障作用,台盼蓝马上进入细胞而显蓝色。活细胞细胞膜有选择透性,对台盼蓝的透性小,进入细胞慢。若染色时间过长,台盼蓝可能通过胞吞或胞饮作用进入细胞。 

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