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U266人骨髓瘤细胞培养中常见细胞问题解析

  • 发布日期:2020-08-26      浏览次数:94
    • 支原体污染会对细胞培养有何影响?

       支原体污染几乎可影响所有细胞之生长参数、代谢及研究之任一数据。故进行实验前,必须确认细胞为mycoplasma-free,实验结果之数据方有意义。

       冷冻保存细胞之方法?

       冷冻保存方法一: 冷冻管置于4℃(30-60 分钟)→-20℃( 30 分钟) → -80℃(16-18 小时或隔夜)→ 液氮罐长期储存。

      冷冻保存方法二: 冷冻管置于已设定程序之可程序降温机中每分钟降1-3℃至–80 ℃以下, 再放入液氮中长期储存。注意:-20℃不可超过1 小时,以防止冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

       悬浮细胞应如何继代处理?

       一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养瓶中,稀释细胞浓度即可。若培养液太多时可分瓶取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养瓶中,加入新鲜培养基稀释至适当浓度,重复前述步骤即可。

      欲将一般动物细胞离心下来,其离心速率应为多少转速?

       欲回收动物细胞,其离心速率一般为300×g (约1,000rpm),5 - 10 分钟,过高之转速过长时间都将造成细胞死亡。合适的离心转速是根据相对离心决定。 RCF=1.119×105×r×(rpm)2,其中 r为离心机转轴中心与离心套管底部内壁的距离;rpm为离心机每分钟的转数;RCF(relative eentrifugal force)为相对离心力,以重力加速度g(980.66cm/s2)的倍数来表示表示单位。

       培养细胞时应使用5%还是10%CO2,或者根本没有影响?

       一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统, 而培养基中NaHCO3的含量将决定细胞培养时应使用的CO2浓度。当培养基中NaHCO3 含量为每公升3.7g时,细胞培养时应使用10% CO2;当培养基中NaHCO3为每公升1.5g时,则应使用5%CO2培养细胞。

       细胞冷冻管解冻培养时,是否应马上去除DMSO?

       除少数特别注明对DMSO敏感之细胞外,绝大部分细胞株(包括悬浮性细胞),在解冻之后,应直接放入含有10-15ml新鲜培养基之培养方瓶中,待隔天再置换新鲜培养基以去除DMSO即可,如此可避免大部分解冻后细胞无法生长或贴附之问题。

       冷冻管应如何解冻?

       取出冷冻管后,须立即放入37℃水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1-2 分钟内大部分融化,特别注意,需残留一小块冰块,就可拿到超净工作台操作细胞,用75%消毒冻存管,用新鲜培养基将细胞转移至培养瓶。另外冷冻管由液氮桶中取出解冻时,必须注意安全,预防冷冻管之爆裂。

       如何用台盼兰计数活细胞?

       将样品适当稀释后,用稀释后的样品和0.4%的台盼兰溶液按1:1混合后,用移液枪点样到血球计数板,置于倒置显微镜下观察、计数,其中蓝色细胞是死细胞,因活细胞排斥台盼兰,不被染色。

       细胞欲冷冻保存时,细胞冷冻管内应有多少细胞浓度?

       冷冻管内细胞数目一般为1-8×106 cells/ml vial。

       细胞冷冻培养基之成份为何?

       动物细胞冷冻保存时使用的冷冻培养基是含9 - 10 %DMSO (dimethyl sulfoxide) 和90 - 95 % 原来细胞生长用之新鲜培养基均匀混合之。注意:由于DMSO 稀释时会放出大量热能,故不可将DMSO 直接加入细胞液中,必须使用前先行配制完成。

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