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养好细胞的基本点

  • 发布日期:2020-07-16      浏览次数:53
    • 胰酶消化程度是要害
      消化一定程度上是对细胞的一种折磨,在使用胰酶(Trypsins)细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差,做流式时的CD Marker 也可能会下降。

      对大部分细胞消化来说,可以在消化到差不多快要脱落的时候,移除大部分胰酶,然后直接加新鲜的培养基将细胞吹打下来,省去离心步骤。残余的胰酶含量很低,所以不会对细胞产生任何影响。
      对于难消化的细胞,如HCT15, LS411和KM12,用不含Ca2+、Mg2+的PBS洗涤一次后,加入稍微多一点胰酶,置37ºC彻底消化(一般为几分钟)至脱落(一晃细胞就掉下来),然后再加含血清的培养基终止胰酶反应、离心 (若是无血清培养基,需改加胰酶抑制剂)。这么做的道理是,细胞消化不彻底,势必会增加吹打辅助脱落的次数,而吹打次数越多,细胞活性越差。

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