养好细胞的基本点

发布日期：2020-07-16      浏览次数：621

胰酶消化程度是要害
消化一定程度上是对细胞的一种折磨，在使用胰酶（Trypsins）细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长，否则细胞铺板后生长状况会较差，做流式时的CD Marker 也可能会下降。

对大部分细胞消化来说，可以在消化到差不多快要脱落的时候，移除大部分胰酶，然后直接加新鲜的培养基将细胞吹打下来，省去离心步骤。残余的胰酶含量很低，所以不会对细胞产生任何影响。
对于难消化的细胞，如HCT15, LS411和KM12，用不含Ca²⁺、Mg²⁺的PBS洗涤一次后，加入稍微多一点胰酶，置37ºC*消化(一般为几分钟)至脱落（一晃细胞就掉下来），然后再加含血清的培养基终止胰酶反应、离心 (若是无血清培养基，需改加胰酶抑制剂)。这么做的道理是，细胞消化不*，势必会增加吹打辅助脱落的次数，而吹打次数越多，细胞活性越差。