目前,胎牛血清(Fetal Bovine Serum, FBS)是细胞培养实验中z使用的试剂,为细胞生长提供丰富的营养物质。
但在外泌体研究中,如果仍然使用胎牛血清培养细胞、通过收集上清液来提取外泌体进行实验,胎牛血清中大量的牛源外泌体将对实验分析造成j大的干扰。
因此,使用FBS时,必须要做牛源外泌体的去除工作。
那么,如何去除胎牛血清中的外泌体呢?
01 超速离心法
顾名思义,该法基于超高速离心机。有些厂家建议操作为120000g,18h,4℃;
02 超滤法
芬兰团队(Roman Kornilov et al.)2018年在Journal of Extracellular Vesicles发表的文章介绍,以超滤的方式去除FBS中的外泌体:
Ultrafiltration EV-depleted FBS (UF-dFBS) was obtained by centrifuging regular FBS in Amicon ultra-15 centrifugal filters (ref: UFC910024, 100kDa Merk Millipore Ltd.,
Tullagreen, Carrigtwohill, Co. Cork, Ireland) for 55 min at 3,000 g.
03 商品化去外泌体血清
目前市面上已有若干品牌的EV-depleted Serum销售,使用方法和常规胎牛血清一致,无需做额外处理。