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细胞冻存操作流程

  • 发布日期:2020-07-06      浏览次数:111
    • 细胞冻存操作流程:

      1、细胞冻存前12~24h,换新鲜培养基,使细胞一直处于对数生长期。

      2、待细胞长至80%汇合时胰酶消化,用新鲜培养基吹打后制成细胞悬液,1000rpm离心10min。悬浮细胞则直接离心。

      3、弃上清,加入冻存液重悬细胞沉淀,调整细胞浓度为3×106~1×107cells/mL。将细胞悬液分至冻存管内,每管1~1.5mL,拧紧盖子。在管壁上做好标记,标明细胞名称、冻存日期等。(细胞冻存液配方可为胎牛血清:培养基:DMSO=461或胎牛血清:培养基:DMSO=191或胎牛血清:DMSO=91,可根据各实验室实际条件调整)

      4、按下列顺序依次降温:室温→4 20min -20 30min -80℃过夜→液氮保存。也可使用程序降温盒更为方便,细胞冻存管放入程序降温盒内可直接放入-80℃过夜,再转至液氮罐内。注意程序降温盒内异丙醇的量必须高于最低刻度线;冻存5次后异丙醇需要跟换一次,以免影响冻存效果。

      5、细胞冻存后应取出一管复苏,检测细胞的存活率。理论上细胞可在液氮内长期保存,为稳妥起见可在细胞冻存半年后复苏培养,观察细胞生长情况,再继续冻存。

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