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TRIzol的使用方法

  • 发布日期:2020-07-02      浏览次数:68
    • TRIzol的使用方法:
        用匀浆器将组织磨碎,加入TRIzol处理组织。5分钟后加入氯Fang,以每分钟12000转离心5分钟,样品即分成水样层、中间层和有机层。

        ※RNA存在于水样层中,收集水样层后可以通过异丙醇沉淀RNA来还原。

        ※在除去水样层后,有机层中的DNA和蛋白质也能相继以沉淀的方式还原:乙醇能使中间层的DNA沉淀析出,在有机层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。

        每100ml TRIzol可以抽提100个六孔板中的样品或10050-80mg的组织样品。无论样品是人、动物、植物还是细菌组织,该方法对少量的组织(50-100mg)和细胞(约五百万个)及大量的组织(≥1g)和细胞(超过一千万个)均有较好的分离效果。

        每一百万细胞用TRIzol抽提可得5-15微克RNA,每毫克组织用TRIzol抽提可得1-10微克RNA(产量因细胞和组织不同而异)。

        TRIzol操作上的简便性允许其同时处理多个样品,所有的操作可以在一小时内完成。

        TRIzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白质的污染,故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、polyA选择、体外翻译、RNA酶保护分析和单分子克隆(PCR)。

        ※如果是用于PCR,当两条引物位于单一外显子内时,建议用级联扩大的DNase I来处理抽提的总RNA

        ※TRIzol试剂能促进不同种属、不同分子量大小的多种RNA的析出。例如,从大鼠肝脏抽提的RNA经过琼脂糖凝胶电泳并用溴化乙啶染色,可见许多介于7kb15kb之间的不连续的高分子量条带(mRNAhnRNA成分),两条优势核糖体RNA条带位于~5 kb 28S)和~2 kb 18S),低分子量RNA介于0.10.3kb之间 tRNA, 5S)。当抽提的RNATE稀释时,其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过ye

        TRIzol对人体有害,使用时应戴一次性手套,注意防止溅出。

       

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