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细胞怎样冻存

  • 发布日期:2020-06-24      浏览次数:84
    • 漫漫人生路,谁都难免会遭遇各种失意或厄运。在凄风苦雨惨雾愁云的考验面前,一个强者,是不会向命运低头的。风再冷,不会永远不息;雾再浓,不会经久不散。风息雾散,仍是阳光灿烂。接下来上海文韧给大家讲讲细胞冻存

      细胞冻存

       

      1. 实验前准备:细胞室及工作台紫外线照射15min;培养液、PBS、胰酶、小牛血清、DMSO、恒温水浴箱37℃预热备用;收集对数生长期细胞,在冻存前一天换液

       

      2.用吸管吸出培养瓶中的细胞培养液,PBS清洗2遍吸出冲洗液,加入适量胰蛋白酶消化。

       

      3. 适时去掉胰蛋白酶,加入少量新培养液。吸管吸取培养液吹打瓶壁上的细胞,使其成为均匀分散的细胞悬液。

       

      4. 用吸管将培养液加入冻存管中,离心(1000r/min,10分钟)。

       

      5. 去上清液,加入与细胞悬液等量的冻存液,用吸管轻轻吹打使细胞均匀

       

      6. 冷存管置于4℃10分钟----20℃30分钟----80℃16~18小时(或隔夜)---液氮槽vaporphase长期储存。-20℃不可超过1h,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量死亡,亦可跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中,惟存活率稍微降低一些。

       

      7.记录每一个冷冻管的位置以确保在以后应用时能够找到每一个冷冻管。

       

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