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人胃癌细胞nci-n87细胞培养的基本技术---(五)细胞分散法

  • 发布日期:2020-06-16      浏览次数:111
    • 五、细胞分散法

      1. 机械分散 对于脑、胚胎、肿瘤等软组织,先用组织匀浆器研磨组织,再通过细胞筛获得单细胞悬液。

      2. 胰蛋白酶消化 适合于消化间质较少的软组织,传代细胞消化也常采用,是应用较广泛的消化酶,由于Ca2+ 和Mg2+ 对胰蛋白酶活性有一定抑制作用,因此须用不含这些离子的缓冲液配制。将组织剪成1mm3大小,置于容器中,加入30~50倍体积的0.25%胰蛋白酶液,消化30~60min。

      3. 胶原酶消化 对胶原有较强的消化作用,适用消化纤维组织、上皮组织及瘤组织等。胶原酶的使用终浓度为200U/ml或0.1~0.3μg/ml,其消化作用缓和。一般将3~5倍胶原酶溶液加入已剪碎的组织块中,数小时或10余小时后,可见组织块逐步变小至几乎看不见,原来澄清的消化液转变成混悬液时,可以终止消化,如组织块较大、细胞量较多时,可于消化期间换消化液一次。消化液经低速离心5min后,去上清液,加入20%小牛血清培养液,轻轻打散细胞团,制成细胞悬液。

      4. EDTA溶液分散 使用浓度为0.02%的EDTA溶液。常用于传代细胞的消化,作用温和,毒性小。

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