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探讨关于血清中悬浮物的问题

  • 发布日期:2020-06-03      浏览次数:240
    • 血清中的悬浮物问题。

      一、问:发现培养的细胞瓶中背景有许多的小黑点,培养液中也有一些漂浮的物。看了之前的帖以为是胶原虫。本打算换液,换液前特意看了下前些天配的培养液,肉眼发现培养 液中有悬浮的颗粒状物质(不多),于是放在镜 下观察,新鲜培养液中有一些悬浮的小颗粒,不多。(培养液是R1640+20%牛血清+1%双抗)于是又将分装在4℃保存的 小牛血清拿出观察,肉 眼可见5、6个白色小小球状的物质,在血清瓶稍靠下的部位悬浮。镜下观察,也有少量的不知 什么物质的东西漂浮。小牛血清是Hyclone新西兰的,标签上写已经经过2μm滤膜过滤处理。根据上述培养液的情况,是否说明培养液已被污染?如果是正常的血清是不是在镜下不应该看到杂物,哪怕是极少量的?根据上述血清的 描述,是不是说明血清也存在问题,还能用 吗?补充:细胞培养以来生长状态就不好。买血清的时候厂家说明不用灭 活,所以未灭活。

      答:(1)血清应该-20℃保存,解冻血清时,请按照的逐步解冻法(-20℃至4℃至室温),若血清解冻时改变 的温度太大实验显示非常容易产生沉淀物。

      (2)胎牛血清中沉淀物的出现有许多种原因,但Z普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,而血纤维蛋白 在血清解冻后,也会存在于血清中,亦可造 成沉淀物。

      (3)若您一次无法用完一瓶,建议您无菌分装血清,再放回冷冻,若存放于4℃时,请勿超过一个月,储存 在2-8℃时,血清中的各种蛋白和脂蛋白,可能聚集而形成沉淀或可见 的混浊。

      (4)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

      (5)排出了血清的原因,在考虑实验用品和无菌操作的问题。

      (6)细菌病毒、衣原体、黑胶虫污染也很常见,如果细胞死的太多,影响较大建议更换培养液。

      二、问:今天在配培养液时,发现血清里面有小碎片样的漂浮物,血清仍然清亮,不浑浊。不知道是什么, 问了实验室的学长,说仍然可以用,但还是不放心,没有用血清。这可能是血清出了什么问题 ?我的血清用了一个月不到

      答:可能的原因:

      (1)培养液配置时Votex不够,当时是清亮的,但过一段时间会析出来

      (2)真菌污染。

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