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新西兰优等胎牛血清SH30406.05使用时所产生的常见问题

  • 发布日期:2020-05-26      浏览次数:152
    • 新西兰优等胎牛血清SH30406.05牛血清的使用所产生的常见问题

      (一)由于血清营养丰富,贮存条件特殊,因此在贮存和使用过程中容易产生以下问题:

      1、改变培养液的pH值

      牛血清的pH理论值为7.0~8.0,培养基在加入规定量的碳酸氢钠后(即达到细胞生长所需要的渗透压),再加入10%的牛血清,一般会使培养液的pH值发生改变。因此在使用过程中应注意pH的变化,如有必要可用1mol/L NaOH或1mol/L HCl调pH到所需值。

      2、由于血清的营养成分丰富,非常适合细菌、真菌和支原体等生长。国产血清大部分采用手工分装,因此容易把微生物带入而使得血清被污染。使用前如果没有及时发现,将会把污染物带入正在培养的细胞中,而使得细胞不能正常生长。

      3、血清在贮存解冻过程中会产生沉淀,这是由于血清中含有大量脂蛋白、纤维蛋白及多肽类物质,在-15℃冷冻保存解冻后就会自然形成沉淀,随着保存时间的延长,沉淀量会增加。因此在融化血清时一般应先在4℃放置使之解冻,然后放在室温使血清完全融化,以避免沉淀的增加。添加血清时应避免把沉淀加入培养液,否则由于沉淀的存在会使得所培养的细胞产生大量黑点,或者细胞表面将会覆盖一层油状物质,影响细胞的正常生长。为减少血清的损失,可以把有沉淀的血清收集起来进行离心处理,将上清液加入培养液使用(一般不建议采用过滤的方法除去沉淀,因为沉淀会堵塞滤膜而无法过滤)。

      (二)大规模细胞培养中牛血清对细胞及病毒滴度的影响

      血清是一种成分复杂的混合物,不同批次血清对细胞生长的促进作用不同。大规模细胞培养中由血清引起的细胞生长状态不佳及病毒滴度的影响表现在以下几个方面:

      1、细胞生长速度缓慢,长满单层时间长;从同一细胞瓶中分出两瓶细胞,用同一种培养液,分别加入10%的对照血清和待检血清,在相同条件下培养72小时,会出现对照血清长满单层,而待检血清大约只有60~70%,这种血清就不适合用来大规模培养细胞。

      2、细胞传代后形态不正常,细胞状态发生变化 ;由于血清的质量问题,使原本状态正常的细胞经传代后形态会变差;比如:细胞瓶里会出现一些蠕动的小黑点(并非污染),或者细胞表面形成一层油状覆盖物;细胞的轮廓变得模糊,细胞之间的间隙被血清中的蛋白颗粒填充,从而影响细胞向四周扩展生长。

      3、细胞传几代后就出现脱壁现象,不能连续传代 ;质量较差的血清缺乏某种细胞的贴壁因子,会使细胞在传代过程中逐渐丧失贴壁的能力。细胞会从正常的贴壁状态,边缘开始萎缩,上翘。观察到的现象就是细胞表面不光滑,晃动细胞瓶会看到细胞表面有絮状物随培养液波动。随着传代次数增加,细胞萎缩的情况越来越严重,直到z终完全脱壁而死亡。

      4、细胞长的很好,致密的单层,状态也很正常,但是接毒后细胞基本不发生病变,做滴度检测几乎测不出抗原滴度。这种情况也许是因为血清中含有与接种的病毒有同源的特异性抗体。比如血清中经常会存在乙脑抗体,牛腹泻病毒抗体等,如果存在这些抗体,就会把接进去的病毒给中和掉。如果抗体滴度很高,病毒会被抗体完全中和,就没有病毒颗粒在细胞中增殖,所以会检测不到病毒滴度。这种情况给疫苗企业造成的损失是相当大的,不产毒等于前面所做的那么多工作全部白费,浪费人力、物力,尤其是时间上的浪费,从培养细胞开始到接病毒,到收液至少需要一两个月,一旦出现不产毒的情况,那么这一两月时间就白白浪费掉了,这也是牛血清给疫苗企业造成的风险之一。

      5、细胞生长的状态一般,产毒少,毒价低。这种情况比较常见,细胞是病毒的载体,由于血清质量不好,导致细胞生长状态不好,病毒就无法进行正常的复制。并非所有病毒都不能复制,所以就造成疫苗的效价不够,可能造成不合格产品。

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