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关于胎牛血清,您真的了解吗?需要注意哪些?

  • 发布日期:2020-05-25      浏览次数:109
    •  如何避免血清中产生沉淀?

      按如下操作可避免沉淀的产生:

      (1)解冻血清时,请随时将之摇晃均匀,使温度及成分均一,减少沉淀的发生。

      (2) 血清分装冻存时,须规则摇晃均匀(小心勿造成气泡),使温度与成分均一。

      (3) 勿直接由-20直接至37解冻,因温度改变太大,容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。

      (4) 勿将血清置于37太久,否则血清会变得浑浊,同时血清中许多较不稳定的成份也会因此受到破坏,从而影响血清的品质。

      (5) 血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以无须做此步骤。

      (6) 若必须做血清的热灭活,请遵守56,30分钟的原则,并且随时摇晃均匀。温度过高,时间过久或摇晃不均匀,都会造成沉淀物的增多。

      培养基中添加了血清和抗生素后,可长期保存吗?

      一旦您在新鲜培养基中添加了血清和抗生素时,您应该在两到三周内使用它。因为一些抗生素和血清中的基本成分在解冻后就开始降解。

      为什么要热灭活血清?

      加热可以灭活补体系统。激活的补体参与溶解细胞事件,刺激平滑肌收缩,细胞和血小板释放组胺,激活淋巴细胞和巨噬细胞。在免疫学研究,培养ES细胞、平滑肌细胞时,推荐使用热灭活血清。

       有必要做热灭活吗?

      实验显示,经过正确处理的热灭活血清,对大多数的细胞而言是不需要的。经此处理过的血清对细胞的生长只有微小的促进,或完全没有任何作用,甚至通常因为高温处理影响了血清的质量,而造成细胞生长速率的降低。而经过热处理的血清,沉淀物的形成会显著的增多,这些沉淀物在倒置显微镜下观察,像是“小黑点”,常常会让研究者误以为是血清遭受污染,而把血清放在37环境中,又会使此沉淀物更增多,使研究者误认为是微生物的分裂扩增。

      若非必须,可以不需要做热处理这一步。不但节省时间,更确保血清的质量!

      细胞培养中出现黑点是污染吗?如何处理?

      一旦您在细胞培养的过程中发现有黑点生成,首先,要肉眼观察培养基是否混浊,然后,在镜下观察培养细胞生长的状态,黑点是否游动。如果细胞被污染,微生物则会大量繁殖,培养基就会迅速变黄、变混浊。污染包括细菌污染、支原体污染等。

      如果在镜下观察细胞,生长状态良好,与黑点出现前相比,没有任何变化,那么,黑点的出现可能与以下几种情况有关:

      (1)细胞生长过老,破碎的细胞残骸;

      (2)血清质量不好,反复冻融的结果;

      (3)配制培养基的pH值偏高,不宜细胞生长;

      (4)配制培养基的水质、容器不合格。可应用离心、过滤的方法去除这些黑点;

      (5)培养原代细胞中出现小黑点,可能是原代组织中的杂质,多次传代可以消除。

      细胞培养中如何防止黑点生成?

      (1) 尽可能地减少血清冻融次数。

      (2) 培养基无需37水浴。

      (3) 培养基保持z佳PH值7.0- 7.2。

      (4) 严格控制配制培养基的水质,容器定期刷洗。

      (5) 掌握细胞传代的z佳时机,细胞切勿生长过老。

      小牛血清和胎牛血清有何区别与注意事项?

      来源不同:胎牛血清(Fetal Bovine Serum ,FBS) 是在屠宰怀孕母牛的时候,通过心脏穿刺采血获取的胎牛的血清,新生牛(小牛)血清(Calf serum, CS)采自出生10至14 天的小牛。

      组份与比例不同:两者所含的促细胞生长因子、促贴附因子、激素及其他活性物质等组份与比例不同,用途与用法不同:某些细胞必需胎牛血清才能生长,而有些细胞只需小牛血清即可,使用浓度不同,一般在5%-10%,有特殊要求的浓度在20%。

      血清保存和使用须注意:血清应保存在-5至-20,若存放在4不可超过一个月。解冻血清时 ,应先将血清至于2-8冰箱,并经常摇匀使之溶解,然后至室温放置使之升温,不可将冷冻的血清直接放入37水浴或者温箱中,如放在37解冻,颜色加深,粘稠度也会增加,血清在解冻和热灭活后,应按用量分装并于-20保存,避免反复冻融。

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