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hyclone sh30070.03胚胎干细胞特级胎牛血清的冻存

  • 发布日期:2020-05-08      浏览次数:117
    • 胎牛血清是妊娠后期剖腹取出的胎牛血清。胎牛血清营养成分完全而丰富,代谢产物极少,微生物感染的可能性最小,品质高,是组织细胞培养和病毒增殖时的重要营养来源。特级胎牛血清价格昂贵,是经过胚胎干细胞测试的专用级血清,级胎牛血清具有极低的BSE和病毒感染风险这类产品符合USP/EP标准,并通过相应的多达90项质量测试,包括EMA病毒测试、USP/EP支原体、内毒素、性能、生化/激素分析和Oritain指纹识别。大多数产品经过三级0.1μm过滤制造。特级胎牛血清主要用于培养胚胎干细胞,间充质干细胞等干细胞。

      细胞冻存步骤

      1、在特级胎牛血清冷冻管上标记好日期、研究者姓名、细胞数、细胞传代数和细胞类型(以及任何其他有用信息,比如遗传修饰)。

      2、如果细胞贴壁,则去除细胞培养基,用PBS洗涤,加入足量胰蛋白酶覆盖细胞并在37°C培养箱中孵育约2分钟。在细胞培养基中重悬细胞并移入50mLFalcon管中。

      3、如果细胞为悬浮状态,只需将所需体积细胞直接移入50mLFalcon管中。

      4、用血细胞计数器进行细胞计数以确定其活力。用于冷冻保存的细胞活力至少应为75%。

      5、在室温下以1,000rpm离心5分钟。

      6、准备冷冻培养基。

      7、去除上清液,轻轻散开沉淀物。

      8、添加冷冻培养基至所需的细胞密度。对于哺乳动物细胞,所需细胞密度通常为10^6/mL冷冻培养基。在室温下,细胞不应在冷冻培养基中超过10分钟。

      9、在各冷冻管中各分装1mL,并盖紧盖子。

      10、室温下将冷冻管移至CoolCell快速冷冻机中,然后放入-80°C冰箱中。CoolCell快速冷冻机将确保温度以1°C/分钟稳步下降。

      11、大约24小时后,从CoolCell快速冷冻机中取出冷冻管并转移到液氮中长期储存。

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